線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅰ/NADH紫外分光光度法

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產(chǎn)品名稱：線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅰ/NADH紫外分光光度法測(cè)試盒
規(guī)格 : 25管/24樣
測(cè)試方法: 紫外分光光度法
貨號(hào)：GOY-01S6333
分類：輔酶Ⅰ系列
商品介紹：
復(fù)合體Ⅰ（EC 1.6.5. 3）又稱NADH-CoQ 還原酶或NADH脫氫酶，廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞的線粒體中，是線粒體內(nèi)膜中最大的蛋白復(fù)合物。該酶催化一對(duì)電子從NADH傳遞給CoQ，同時(shí)可使O2還原生成O2.-，是呼吸電子傳遞鏈上產(chǎn)生O2.-的主要部位。測(cè)定該酶活性，不僅可以反映呼吸電子傳遞鏈（ETC）狀態(tài)，而且可以反映活性氧（ROS）生成狀態(tài)。

測(cè)定原理

復(fù)合體Ⅰ能夠催化NADH脫氫生成NAD+，在340nm下測(cè)定NADH的氧化速率計(jì)算出該酶活性的大小。

需自備的儀器和用品

紫外分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制
提取液一：液體50mL×1瓶，4℃保存。
提取液二：液體50mL×1瓶，4℃保存。
試劑一：粉劑×1瓶，-20℃保存；臨用前加入40mL試劑四充分溶解待用，用不完的試劑4℃保存；
試劑二：液體18μL×1瓶，4℃保存；臨用前加入2.5mL蒸餾水充分溶解待用，用不完的試劑4℃保存；
試劑三：粉劑×1瓶，-20℃保存；臨用前加入2.5mL蒸餾水充分溶解待用，用不完的試劑4℃保存；
試劑四：液體50mL×1瓶， 4℃保存；
測(cè)定步驟
1、 分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至340nm，蒸餾水調(diào)零。
2、 將試劑一、二、三37℃(哺乳動(dòng)物)或25℃(其它物種)預(yù)熱10分鐘。
3、 加樣表：

樣本的前處理
①總FBP酶提?。航ㄗh稱取約0.1g樣本，加入1mL提取液一，冰浴勻漿后超聲破碎（冰浴，200W，破碎3s，間歇7s，總時(shí)間1min），然后4℃，8000g離心10min，取上清測(cè)定。
②胞漿和葉綠體FBP酶的分離：按照植物組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5～10的比例（建議稱取約0.1g樣本，加入1mL提取液一），冰浴勻漿后于4℃，200g離心5min，棄沉淀，取上清在4℃，8000g離心10min，取上清用于測(cè)定胞漿FBP酶活性，取沉淀加1mL提取液二，震蕩溶解后超聲破碎（冰浴，200W，破碎3s，間歇7s，總時(shí)間1min），然后4℃，8000g離心10min，取上清測(cè)定葉綠體中FBP酶活性。
建議測(cè)定總FBP酶活性，按照步驟①提取粗酶液，若需要分別測(cè)定胞漿和葉綠體中的FBP，則按照步驟②提取粗酶液。
鋅指蛋白851抗體     形成素2抗體（成蛋白）

嗜乳脂蛋白2亞型A1抗體     星形細(xì)胞瘤高表達(dá)蛋白抗體（環(huán)指蛋白100）

0酸化c-fos抗體     星形膠質(zhì)細(xì)胞抗體

0酸化原癌基因c-Jun抗體     星形膠質(zhì)細(xì)胞PEA15抗體

0酸化原癌基因c-kit抗體     星形肌動(dòng)蛋白抗體
大鼠膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子（GDNF）elisa檢測(cè)試劑盒

大鼠角蛋白1(KRT1)elisa檢測(cè)試劑盒

大鼠角蛋白18(KRT18)elisa檢測(cè)試劑盒

大鼠角化細(xì)胞內(nèi)分泌因子(KAF)/雙調(diào)蛋白(AR)elisa分析檢測(cè)試劑盒

大鼠角化細(xì)胞內(nèi)分泌因子(KAF)/雙調(diào)蛋白(AR)elisa檢測(cè)試劑盒
線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅰ/NADH紫外分光光度法測(cè)試盒柱式植物葉綠體 DNAout15 次  化乙錠溶液 ,10 mg/mL1.5mL

線狀 DNA 清除劑30 次  化乙錠清除劑100 次

細(xì)菌 DNAout50 次  化乙錠干粉 (EB)1g

細(xì)菌 DNAout250 次  星形細(xì)胞生長(zhǎng)因子5mL

柱式細(xì)菌 DNAout50 次  星形膠質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子5mL
FBP活性計(jì)算：
（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘生成1 nmol的NADPH定義為一個(gè)酶活力單位。
FBP（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=321.5×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計(jì)算
單位的定義：每g組織每分鐘生成1 nmol的NADPH定義為一個(gè)酶活力單位。
FBP（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(W ×V樣÷V樣總) ÷T=321.5×ΔA÷W
V反總：反應(yīng)體系總體積，1×10-3 L；ε：NADPH摩爾消光系數(shù)，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.1 mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；T：反應(yīng)時(shí)間，5 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g。