人乳腺導(dǎo)管癌細(xì)胞；BT-549 圖片【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

細(xì)胞名稱

人乳腺導(dǎo)管癌細(xì)胞；BT-549 圖片

形態(tài)特性  上皮細(xì)胞樣

生長(zhǎng)特性 貼壁生長(zhǎng)

特征特性  該細(xì)胞1978年由W.G. Coutinho 和 E.Y. Lasfargues建系，源自一位72歲患有乳腺導(dǎo)管癌的白人女性，來源組織包括乳頭及浸潤導(dǎo)管。該細(xì)胞形態(tài)包括上皮樣細(xì)胞及多核巨細(xì)胞，可分泌一種粘性物質(zhì)。

培養(yǎng)條件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS；0.023IU/ml insulin

傳代方法  1:2～1:6傳代，2～3天換液一次

傳代情況 P48

凍存條件  基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS

支原體檢測(cè) 培養(yǎng)法（-）

STR  Amelogenin：X；CSF1PO： 10，12；D13S317：11；D16S539：8；D18S51：15；D19S433：15.2；D21S11：32.2；D2S1338：17；D3S1358：18；D5S818：11；D7S820：9，10；D8S1179：14，16；FGA：19；TH01：9.3；TPOX：8；vWA：15；

同工酶

染色體  73～80，XX

使用權(quán)限 A類

人乳腺導(dǎo)管癌細(xì)胞；BT-549 圖片細(xì)胞培養(yǎng)步驟：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。

二、細(xì)胞處理：

1、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4)將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時(shí)，應(yīng)將細(xì)胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細(xì)胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。

人乳腺導(dǎo)管癌細(xì)胞；BT-549 圖片質(zhì)量保證:

我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測(cè)，*進(jìn)口來源，*保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細(xì)菌、真菌、支原體污染。   細(xì)胞到達(dá)客戶手中，1個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)任何問題，導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次。

人乳腺導(dǎo)管癌細(xì)胞；BT-549 圖片操作步驟：

1）貼壁細(xì)胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺(tái)內(nèi)，吸除或倒掉細(xì)胞瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤洗細(xì)胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細(xì)胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動(dòng)細(xì)胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液?？刂拼荡虻牧Χ龋苊猱a(chǎn)生大量的氣泡，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長(zhǎng)情況。

2）懸浮細(xì)胞傳代：將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細(xì)胞懸液，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。

*    12124    PPLO 瓊脂基礎(chǔ)    250g/瓶    無酚紅， 用于支原體的培養(yǎng)， 每70ml 培養(yǎng)基中添加 10ml 無菌新鮮 酵母浸液和 20ml 馬血清

*    12148    支原體肉湯基礎(chǔ)（Frey）    250g/瓶    無酚紅，用于支原體培養(yǎng)，每 100ml培養(yǎng)基添加 10ml 無菌滅活馬血清

*    12149    肺炎支原體肉湯基礎(chǔ)    250g/瓶    含酚紅，用于肺炎支原體的培養(yǎng)， 使用前添加  20%小牛血清及抑菌 劑

*    12150    解脲支原體肉湯基礎(chǔ)    250g/瓶    用于解脲支原體培養(yǎng)，使用前須向 培養(yǎng)基中添加尿素、小牛血清及抑 菌劑

人乳腺導(dǎo)管癌細(xì)胞；BT-549 圖片Long-Taq DNA 聚合酶500U

木瓜蛋白酶5g

Caspase 2 檢測(cè)試劑盒50 次

CAS298-93-1噻唑蘭250mg

100811-10質(zhì)譜兼容型蛋白銀染試劑盒10 次

β- 半乳糖苷酶檢測(cè)試劑盒300 次