詳細介紹
綠色熒光蛋白標記人結直腸癌細胞;HCT116-GFP*操作步驟:
1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中,將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬片,待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫),PBS沖洗3次,每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,PBS沖洗3次,每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育:按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,滴加在爬片上,于4°C濕盒中孵育一夜,PBS沖洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:選與一抗對應的二抗,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,PBS沖洗3次,每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下觀察,當出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染:用Harris蘇木素復染30s~1min,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍。
10. 封片:將中性樹膠滴在爬片一側(cè),再用蓋玻片蓋上,先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè),以免產(chǎn)生氣泡,封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
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產(chǎn)品名稱 | 綠色熒光蛋白標記人結直腸癌細胞;HCT116-GFP* |
用途 | 僅用科研 |
保存條件 | 4℃保存一年;-20℃長期保存 |
細胞名稱 綠色熒光蛋白標記人結直腸癌細胞;HCT116-GFP*
形態(tài)特性 上皮樣;多角形
生長特性 貼壁生長
特征特性 GFP穩(wěn)定表達
培養(yǎng)條件 IMDM: Iscove's Modiefied Dulbecco's Medium 10%FBS;200ug/ml G418
傳代方法 1:3傳代;3~4天1次。
傳代情況
凍存條件 基礎培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測 培養(yǎng)法(-)
STR Amelogenin:X,Y;CSF1PO:7,10;D13S317:10,12;D16S539:11,13;D18S51:16,17;D19S433:12,13;D21S11:29,30;D2S1338:16;D3S1358:12,18,19;D5S818:10,11;D7S820:11,12;D8S1179:12,14;FGA:18,23;TH01:8,9;TPOX:8;vWA:17,22;
同工酶
染色體
使用權限 A類
綠色熒光蛋白標記人結直腸癌細胞;HCT116-GFP*運輸保存:
采用干冰保存運輸。收到細胞時,若干冰已經(jīng)*融化,請立即將細胞復蘇培養(yǎng);若尚留有干冰,請立即將細胞放入液氮中保存待用,請按條件貯存細胞,切不可將細胞置于高溫環(huán)境。
保存條件:4℃保存一年;-20℃長期保存
用途:只可用于科研。
儲存:液氮。
運輸:干冰(第二代培養(yǎng)末期液氮凍存)。
細胞一般2-3天更換一次培養(yǎng)基,這取決于細胞生長的速度。許多細胞培養(yǎng)實驗室通常在周一,周三,周五更換培養(yǎng)基。
注意:*次植入后,在6-16小時內(nèi)更換培養(yǎng)基,以去除殘留的二甲基亞楓和死亡細胞。到達客戶手中,出現(xiàn)任何問題(人為或者非人為),導致細胞在凍存前死亡,我們公司都可以免費再向客戶提供一次。對于細胞的真實性,支持客戶檢測對應的biomarker,(如證明細胞錯誤,全額退款。)公司針對每株細胞,鑒定gene background,鑒定完成的細胞可以提供數(shù)據(jù),用于證明細胞的真實性,并且?guī)椭蛻舾嗟牧私饧毎匦浴?/p>
川翠定甲 英文名稱: Bonvalotidine A CAS: 分子式: C27H41NO8 20mg
刺囊酸 英文名稱: Echinocystic acid CAS: 510-30-5 分子式: C30H48O4 472.71 10mg
查斯馬寧 英文名稱: Chasmanine CAS: "5066-78-4
" 分子式: "C25H41NO6
" "451.61
" 20mg
粗壯女貞苷N(95%) 英文名稱: "Ligurobustoside N
" CAS: 分子式: "C35H46O18
" "754.74
" 10mg
催吐蘿芙木定 英文名稱: Mitoridine CAS: 3911-19-1 分子式: C25H41NO6 "322.41
" 10mg
車葉草苷 英文名稱: ASPERULOSIDE CAS: 分子式: 20mg
綠色熒光蛋白標記人結直腸癌細胞;HCT116-GFP*N,N-DIETHYL-P-PHENYLENEDIAMINE MONOHYDROCHLORIDEN,N-二乙基對酸2198-58-5
Lanthanum(III) nitrate hexahydrate酸鑭10277-43-7
4-NITROPHENYL-ALPHA-D-GLUCOPYRANOSIDE對基-α-D-葡萄糖吡喃苷3767-28-0
1-Naphthylacetamide1-萘乙酰胺86-86-2
6-Hydroxy-2-naphthoic acid6-羥基-2-萘酸16712-64-4
2-(Trifluoromethoxy)aniline鄰氨基三氧基1535-75-7