原代細(xì)胞線粒體膜勢(shì)能的檢測(cè)

時(shí)間：2017/3/30閱讀：527

原代細(xì)胞線粒體在細(xì)胞凋亡的過程中起著樞紐作用，多種細(xì)胞凋亡刺激因子均可誘導(dǎo)不同的細(xì)胞發(fā)生凋亡，而線粒體跨膜電位的下降，被認(rèn)為是細(xì)胞凋亡級(jí)聯(lián)反應(yīng)過程中zui早發(fā)生的事件，它發(fā)生在細(xì)胞核凋亡特征(染色質(zhì)濃縮、DNA斷裂)出現(xiàn)之前，一旦線粒體DYmt崩潰，則細(xì)胞凋亡不可逆轉(zhuǎn)。

線粒體跨膜電位的存在，使一些親脂性陽(yáng)離子熒光染料如Rhodamine 123、3，3-Dihexyloxacarbocyanine iodide[DiOC6(3)]、Tetrechloro-tetraethylbenzimidazol carbocyanine iodide[JC-1]、Tetramethyl rhodamine methyl ester(TMRM)等可結(jié)合到線粒體基質(zhì)，其熒光的增強(qiáng)或減弱說明線粒體內(nèi)膜電負(fù)性的增高或降低。

方法：將正常培養(yǎng)的原代細(xì)胞和誘導(dǎo)凋亡的細(xì)胞加入使用終濃度為Rhodamine 123(1mM)或終濃度為DiOC6(25nM)，JC-1(1mM)，TMRM(100nM)，37°C平衡30min，流式細(xì)胞計(jì)檢測(cè)細(xì)胞的熒光強(qiáng)度。

注意事項(xiàng)

1. 始終保持平衡染液中pH值的一致性，因?yàn)閜H值的變化將影響膜電位。

2. 與染料達(dá)到平衡的原代細(xì)胞懸液中如果含有蛋白，他們將與部分染料結(jié)合，降低染料的濃度，引起假去極化。

原代細(xì)胞線粒體膜勢(shì)能的檢測(cè)

會(huì)員登錄

收藏該商鋪

提示