技術文章
細胞培養(yǎng)過程中添加劑起到的作用
閱讀:3284 發(fā)布時間:2017-7-13腫瘤細胞能量來源:谷氨酰胺
L-谷氨酰胺是一種氨基酸,細胞的重要能量來源、參與蛋白質(zhì)的合成和核酸代謝。同時L-谷氨酰胺不穩(wěn)定,在中性的水溶液中會自發(fā)降解; 降解產(chǎn)物對細胞有毒性 (對干細胞,原代細胞影響尤其大)。能影響細胞活性、蛋白表達水平及糖基化模式等。那如何解決呢?
方案有二:
? 選擇不含谷氨酰胺的培養(yǎng)基,自己添加
? 選擇穩(wěn)定的谷氨酰胺替代物
經(jīng)過科學家不斷努力,終于找到了穩(wěn)定的谷氨酰胺替代物: glutaGRO。它有何方功能呢?原來,它是由L-丙氨酸和L-谷氨酰胺縮合形成的二肽,穩(wěn)定性高,可在室溫下保存,2年穩(wěn)定 (谷氨酰胺需冷凍保存),使用更方便。同時不易降解,不產(chǎn)生有毒性氨,更利于細胞生長。但仍需注意:該替代物適于哺乳動物細胞培養(yǎng),但不適合昆蟲腫瘤細胞培養(yǎng)體系?。。?br />能量來源 : 丙酮酸 (Sodium Pyruvate)
丙酮酸鈉可以作為細胞培養(yǎng)中的替代碳源。當葡萄糖不足的時候,細胞可以代謝丙酮酸鈉,保證細胞更好地生長。同時某些對葡萄糖利用存在問題的細胞必需添加哦。
平衡鹽溶液
平衡鹽溶液主要是由無機鹽、葡萄糖組成;它的作用是維持細胞滲透壓平衡,保持pH穩(wěn)定及提供簡單的營養(yǎng);同時用于取材時組織塊的漂洗、細胞的漂洗、配制其他試劑等。
它由這些小伙伴組成:PBS 磷酸鹽緩沖液,DPBS(Dulbecco’s Phosphate-Buffered Salines), Earle’s 平衡鹽, Hank’s 平衡鹽。具體每種試劑的成分,歡迎大家留言咨詢,或者訪問:http://cellgro.com/。
培養(yǎng)基中的pH緩沖劑
絕大多數(shù)細胞的*生長條件是pH 6.8-7.8。
多數(shù)培養(yǎng)基利用碳酸氫鈉進行緩沖,碳酸氫鈉的緩沖需要二氧化碳。其中高碳酸氫鈉 (1.5 – 3.7g/L) 需要 5 – 10% CO2,低碳酸氫鈉(0.35g/L) 不需要二氧化碳孵箱。當然,也有不依賴于二氧化碳的氫離子緩沖劑如:HEPES,在一定范圍內(nèi)對細胞無毒性作用。能較長時間控制恒定的pH范圍,保證細胞的良好生長。大家可以根據(jù)腫瘤細胞和實驗要求具體選擇。