狼源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒產(chǎn)品特點:

1. 使用化學(xué)修飾的熱啟動聚合酶，反應(yīng)特異性高，*程度地避免了非特異擴增；

2. 反應(yīng)緩沖液經(jīng)充分優(yōu)化，反應(yīng)靈敏快速，40個循環(huán)只需20多分鐘；

3. 抗干擾能力強，反應(yīng)重復(fù)性高，適合對土壤、糞便、腫瘤和血液來源的復(fù)雜樣本中的靶基因進行檢測分析。

在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程，zui后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。

 特異性熒光標記：

 TaqMan法

 TaqMan探針的特性：

（1）5′端標記有報告基團（Reporter, R），如FAM、VIC等

（2）3′端標記有熒光淬滅基團 （Quencher, Q）

（3）探針完整，R所發(fā)射的熒光能量被Q基團吸收 ，無熒光， R與Q分開，發(fā)熒光

（4）Taq酶有 5′→3′外切核酸酶活性，可水解探針

相對定量通過內(nèi)標定量：

內(nèi)標（Endogenous Control）通常是β-actin、GAPDH基因等看家基因，在細胞中的表達量或在基因組中的拷貝數(shù)恒定，受環(huán)境因素影響小，內(nèi)標定量結(jié)果代表了樣本中所含細胞或基因組數(shù)量。

A549, 人肺癌細胞系

SKOV3/Taxol-25, 人卵巢癌紫杉醇耐藥細胞株

A-375 [A375], 人惡性黑素瘤細胞株

A549/DDP, 人肺腺癌耐藥細胞株

SP2/0, 小鼠骨髓瘤細胞

WM35, 人黑色素瘤細胞

BxPC-3, 人原位胰腺腺癌細胞株

U-2 OS, 人骨肉瘤細胞

WM451, 人黑色素瘤細胞

SW 1990 [SW-1990, SW1990] , 人胰腺癌細胞

C6, 大鼠腦膠質(zhì)瘤細胞

UM-UC-3, 人膀胱移行細胞癌

Hela, 人宮頸癌細胞系

HNE2, 人鼻咽癌細胞系

SKOV3 [SK-OV-3], 人卵巢癌腺癌細胞系

786-O [786-0], 人腎透明腺癌細胞

HEC-1A, 人子宮內(nèi)膜癌細胞系

Caki-1, 人腎透明細胞癌皮膚轉(zhuǎn)移細胞

Ishikawa, 人子宮內(nèi)膜癌細胞系

ACHN, 人腎細胞腺癌細胞

JEC, 人子宮內(nèi)膜腺癌細胞系

BPH-1, 人前列腺增生細胞

RL95-2, 人子宮內(nèi)膜腺癌細胞系

Ca Ski, 人宮頸癌細胞

MCF-7 [MCF7], 人乳腺癌細胞系

Raw264.7, 小鼠單核巨噬細胞白血病細胞

GBC-SD, 人膽囊癌細胞

5637, 人膀胱癌細胞

CNE1, 人鼻咽癌細胞系

HT-29, 人結(jié)腸癌細胞

T24, 人膀胱癌細胞

5-8F, 人高轉(zhuǎn)移鼻咽癌細胞系

HCT116, 人結(jié)直腸癌細胞