蘇木精-伊紅染色使用說明

【試劑配制】

蘇木精染液蘇木精配方很多，現(xiàn)介紹常用的是Harris蘇木精染液。

蘇木精 1g

95％乙醇溶液 10ml

鉀礬或銨礬 20g

蒸餾水 200ml

氧化汞 0.5g

冰醋酸 8.0ml

先將蘇木精溶于乙醇溶液。鉀礬加溫溶解燒瓶后，將倒入，繼續(xù)加熱1min。加熱停止后，緩慢加入氧化汞0．5g，再繼續(xù)加熱煮沸1min。迅速將燒瓶移人冰水內(nèi)。染液冷卻呈深色時(shí)，加冰醋酸過濾后即可使用。棕色磨口瓶保存。室溫保存2個(gè)月，4℃保存4個(gè)月左右。

1.0％伊紅染液將1.0g水溶性伊紅溶100ml蒸餾水中，每100ml伊紅液中加0.2ml冰醋酸。

【實(shí)驗(yàn)步驟】

(1)石蠟片經(jīng)脫蠟、水化，單層細(xì)胞片經(jīng)漂洗固定。

(2)蘇木素染液染5～10min(染色時(shí)間與溫度、染液成熟度有關(guān))。

(3)自來水換數(shù)次，標(biāo)本轉(zhuǎn)為深藍(lán)色。

(4)分色：浸入1％稀鹽酸乙醇液(100ml 75％乙醇溶液中加1d鹽酸)分色數(shù)秒鐘至1min，脫去多余的藍(lán)浮色，標(biāo)本轉(zhuǎn)為淡紫紅色鏡下呈紫紅色，胞質(zhì)無色或灰藍(lán)色(后者為幼稚細(xì)胞)。

(5)藍(lán)化：自來水浸洗10min或數(shù)小時(shí)，甚至更長(zhǎng)，標(biāo)本從淡紫紅色轉(zhuǎn)為鮮艷的淺藍(lán)色。注意：為縮短自來水浸洗時(shí)間，使蘇木素更加顯色，可將標(biāo)本置淡氨水溶液(400ml自來水加氨水2滴)中10min，切片很快呈鮮艷的淺藍(lán)色，經(jīng)此處理的標(biāo)本，要經(jīng)自來水充分浸洗，否則會(huì)影響伊紅染色。

(6)蒸餾水漂洗。

(7)伊紅染液5～10min，進(jìn)行對(duì)比染色。

(8)用蒸餾水洗去玻片的浮色,經(jīng)70％、80％、90％梯度乙醇溶液脫水各一次，再分別經(jīng)95％、100％乙醇溶液脫水各兩次，每次1min。

(9)浸入二甲苯兩次，每次1min。中性樹膠封片

【注意事項(xiàng)】

(1)Harris蘇木精染液即配即用，不能久存，宜少量配用。

(2)HE染色時(shí)，除大批標(biāo)本采取浸染外，一般以滴染為好。染液反復(fù)使用而被水稀釋,使特異性染色和染色速度下降。

(3)蘇木精染液出現(xiàn)沉淀現(xiàn)象，是染液變質(zhì)的一種指示，但濾液仍可使用一段時(shí)間。蘇木精染液效力判斷方法為：將蘇木精染液滴人自來水中，若染液出現(xiàn)由紫紅色變?yōu)樗{(lán)色的現(xiàn)象，即證實(shí)染液有效。

(4)蘇木精染色后，鹽酸乙醇溶液分色是關(guān)鍵步驟：以細(xì)胞核染色清晰、細(xì)胞質(zhì)基本無色為佳。核過染，延長(zhǎng)分色時(shí)間；染色太淺，則應(yīng)重新染色。

(5)伊紅染色后，低濃度乙醇溶液脫水后極易脫色：為防止此現(xiàn)象的發(fā)生，標(biāo)本脫水至95％乙醇溶液后，再轉(zhuǎn)入95％乙醇溶液配制的1％伊紅液中復(fù)染3～5min分鐘，然后繼續(xù)脫水透明,可獲得滿意效果。

(6)*脫水后，轉(zhuǎn)入二甲苯中出現(xiàn)混濁現(xiàn)象，為脫水不*的表現(xiàn)。此時(shí)應(yīng)退回乙醇溶液或更換100％乙醇重新脫水。

(7)封片時(shí)，蓋玻片要大于切片。切片裸露，標(biāo)本很快褪色。

(8)市售95％乙醇溶液常含雜質(zhì)，只能用于脫水或清潔玻片。

(9)二甲苯是一種易揮發(fā)的有毒液體，實(shí)驗(yàn)者要帶眼罩、口罩、手套，在通風(fēng)的地方操作。