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微載體培養(yǎng)概述

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微載體是目前*的zui有發(fā)展前途的一種動物細胞大規(guī)模培養(yǎng)技術(shù),其兼具懸浮培養(yǎng)和貼壁培養(yǎng)的優(yōu)點,放大容易。目前微載體培養(yǎng)廣泛用于培養(yǎng)各種類型細胞,蛋白質(zhì)產(chǎn)品,如293細胞,成肌細胞,Ve r o細胞,CHO細胞。常用商品化微載體有三種:Cytodex ,Cytopore和Cytoline。 使用較多的反應器有兩種:貝朗公司的BIOSTAT B反應器,使用雙槳葉無氣泡通氣攪拌系統(tǒng);NBS公司的CelliGen,CelliGen PlusTM和Bioflo3000反應器,使用Cell-lift雙篩網(wǎng)攪拌系統(tǒng)。兩種系統(tǒng)都能實現(xiàn)培養(yǎng)細胞和收獲產(chǎn)物的有效分離。 微載體培養(yǎng)293細胞,首先要選擇合適的微載體類型和攪拌速度。接種細胞可用1L spinner微載體培養(yǎng)系統(tǒng)或是其它貼壁培養(yǎng)方式準備,采用灌流培養(yǎng),培養(yǎng)周期10-15天,能達到的細胞密度為5-10×106/ml。

無血清懸浮培養(yǎng) 無血清懸浮培養(yǎng)是用已知人源或動物來源的蛋白或激素代替動物血清的一種細胞培養(yǎng)方式,它能減少后期純化工作,提高產(chǎn)品質(zhì)量,正逐漸成為動物細胞大規(guī)模培養(yǎng)的研究新方向。要實現(xiàn)293細胞無血清懸浮培養(yǎng)必須先將貼壁培養(yǎng)293改造為懸浮培養(yǎng)293S細胞并尋找適合高密度無血清培養(yǎng)的培養(yǎng)液配方。 懸浮培養(yǎng)時,由于缺少血清和蛋白的保護作用,293S對剪切力的敏感度增加,難以達到高密度培養(yǎng),導致293S產(chǎn)生病毒的數(shù)量比貼壁培養(yǎng)低5-10倍左右。細胞接種后,灌流培養(yǎng)7天,達到細胞密度5×106/ml,增殖5-10倍。

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