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密度梯度離心實驗

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用一定的介質(zhì)在離心管內(nèi)形成一連續(xù)或不連續(xù)的密度梯度,將細胞混懸液或勻漿置于介質(zhì)的頂部,通過重力或離心力場的作用使細胞分層、分離。
這類分離又可分為速度沉降和等密度沉降平衡兩種。
A等速度沉降,B等密度沉降
速度沉降(velocity sedimentation)主要用于分離密度相近而大小不等的細胞或細胞器。這種沉降方法所采用的介質(zhì)密度較低,介質(zhì)的zui大密度應小于被分離生物顆粒的zui小密度。生物顆粒(細胞或細胞器)在十分平緩的密度梯度介質(zhì)中按各自的沉降系數(shù)以不同的速度沉降而達到分離。
等密度沉降(isopycnic sedimentation)適用于分離密度不等的顆粒。細胞或細胞器在連續(xù)梯度的介質(zhì)中經(jīng)足夠大離心力和足夠長時間則沉降或漂浮到與自身密度相等的介質(zhì)處,并停留在那里達到平衡,從而將不同密度的細胞或細胞器分離。介質(zhì)的zui高密度應大于被分離組分的zui大密度,而且介質(zhì)的梯度要求較高的陡度,不能太平緩。這種方法適于分離細胞器,而不太適于分離和純化細胞。

 

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