產(chǎn)品展廳收藏該商鋪

您好 登錄 注冊

當前位置:
上海研生實業(yè)有限公司>資料下載>小鼠血管平滑肌細胞實驗原理

資料下載

小鼠血管平滑肌細胞實驗原理

閱讀:1539          發(fā)布時間:2017-7-27
提 供 商 上海研生實業(yè)有限公司 資料大小 28.9KB
資料圖片 下載次數(shù) 37次
資料類型 JPG 圖片 瀏覽次數(shù) 1539次
免費下載 點擊下載    

小鼠血管平滑肌細胞描述: 
小鼠血管平滑肌細胞增殖能力取決于細胞取材、培養(yǎng)技術(shù)、培養(yǎng)條件等綜合因素。請按照正確的培養(yǎng)方法來解凍、傳代,以此保證細胞具備良好的增殖能力,方便您的后繼研究順利進行。 
小鼠腦動脈血管平滑肌細胞主要功能:
(1)  血管平滑肌細胞的再生能力可引發(fā)血管病變。
(2)   細胞表達ICAM-1和VCAM-1,能促進血管壁中炎癥反應(yīng)并對血管疾病的發(fā)展和穩(wěn)定起著重要作用。
小鼠腦動脈血管平滑肌細胞與主要病生理變化:
(1)腦動脈硬化。
(2)腦動脈血管瘤。
小鼠腦動脈血管平滑肌細胞的基本特性:
(1) 組織來源于正常小鼠腦動脈組織。
(2) 鑒定:肌動蛋白,alpha-SMA和Desmin免疫熒光染色。
(3  原代細胞培養(yǎng)末期液氮凍存。
(4)每凍存管細胞數(shù):>1×106個/管/1ml。
(5)肌動蛋白,alpha-SMA和Desmin免疫熒光染色驗證。
(6)不含有HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌。
質(zhì)量控制: 本細胞經(jīng)過了檢測,不含有細菌、真菌、病毒(HIV、HBV、HCV)、支原體。 
培養(yǎng)條件:37℃,5% CO2,PH值7.2~7.4,無菌恒溫培養(yǎng)。 
用途: 本產(chǎn)品只提供給進一步的科研使用,不可應(yīng)用于治療等其他方面。
細胞相關(guān)操作(注意:細胞操作都需嚴格按照無菌操作)
收到復(fù)蘇好的貼壁細胞的處理方法:
先從外包裝盒拿出細胞瓶,在細胞瓶表面噴一層酒精,并小心去掉封口膜;
在顯微鏡下觀察細胞狀態(tài),并確定是否染菌,如有染菌,請立即拍照,并將細胞丟掉;
將培養(yǎng)瓶置于37°C,5% CO2的無菌培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4-6小時;
倒掉多余的培養(yǎng)基,留正常體積的培養(yǎng)基;
重新將培養(yǎng)瓶置于37°C,5% CO2的無菌培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過夜
6. 第二天傳代。
收到凍存細胞的處理方法:
1.37°C水浴預(yù)熱培養(yǎng)基;
從液氮中取出細胞迅速放入37°C水浴快速解凍(解凍后不要繼續(xù)暖細胞);
在超凈臺中加入5ml培養(yǎng)基重懸細胞,1000rpm離心5min;
4.棄上清,加入5ml培養(yǎng)基重懸細胞后轉(zhuǎn)入T25培養(yǎng)瓶中,輕輕晃勻;
5.置于37°C,5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)(培養(yǎng)瓶蓋沒有透氣孔的話,瓶蓋不要擰太緊);
6.第二天,用新鮮的培養(yǎng)基給細胞換液后繼續(xù)培養(yǎng)。
小鼠血管平滑肌細胞傳代
1.當細胞融合度達到80%以上時,給細胞傳代;
2.37°C水浴預(yù)熱培養(yǎng)基;
3.在超凈臺中,棄培養(yǎng)基,加入2-5mlPBS清洗細胞后,再加入1ml胰酶消化細胞;
4.顯微鏡下觀察到細胞變圓,有細胞開始脫離瓶壁時,加入5ml培養(yǎng)基終止消化;
5.用移液器輕輕吹下瓶壁上剩余的細胞,并輕輕吹打?qū)⒓毎瞪ⅲ?br />6.將細胞移入離心管中,1000rpm離心5min;
7.棄上清,加入15-20ml的培養(yǎng)基重懸細胞后轉(zhuǎn)入T75培養(yǎng)瓶中或按適當比例傳到T25瓶中(確保細胞貼壁后融合度在25-50%之間),細胞密度在1×104 cells/cm2 (2.5×105 cells/T-25瓶),混勻細胞懸液,確保均勻分布;
8.將培養(yǎng)瓶置于37°C,5% CO2的無菌培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
細胞凍存
1.37°C水浴預(yù)熱培養(yǎng)基;
2.消化細胞后給細胞計數(shù):
1)洗凈晾干血小板計數(shù)板和蓋玻片,將蓋玻片*覆蓋計數(shù)區(qū);
2)充分混勻細胞,取少量(0.1-0.5ml)細胞懸液與等體積的染色液臺盼藍混合,移液器吹吸混合均勻,用移液器取20ul混合液從蓋玻片兩端(與中間凹槽平行的兩端)分別打入細胞,以細胞懸液剛好浸濕蓋玻片為佳;
3)顯微鏡下,數(shù)四個計數(shù)區(qū)的總細胞數(shù),無活性細胞染成藍色,活細胞不被染色;
4)細胞密度=細胞總數(shù)/4×10000×2;
這里10000是不變的,因為計數(shù)的細胞是在體積為1mm×1mm×0.1mm即10-4cm3計數(shù)池內(nèi),1cm3=1ml,將四個計數(shù)區(qū)的細胞數(shù)除以4取平均數(shù),乘2是補償加等體積臺盼藍形成的稀釋。
5)細胞活性=活細胞數(shù)/細胞總數(shù)×100%。
注:細胞密度高時,可調(diào)整細胞懸液和臺盼藍的比例,計數(shù)時乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)即可。
3.當細胞密度達到傳代密度且細胞活性在90%以上時,可以凍存細胞。
4.在超凈臺中將要凍存的細胞移入離心管,1000rpm離心5min。
5.棄上清,用90%培養(yǎng)液+10%DMSO的混合液重懸細胞,并調(diào)整細胞密度為1-3×106/ml。
6.將細胞懸液分裝到凍存管中(1-1.5ml/管)。
7.將裝有小鼠血管平滑肌細胞的凍存管放入程序降溫凍存盒,-20°C放1-2h后,-80°C過夜,然后快速轉(zhuǎn)移到液氮中。

收藏該商鋪

登錄 后再收藏

提示

您的留言已提交成功!我們將在第一時間回復(fù)您~

對比框

產(chǎn)品對比 產(chǎn)品對比 聯(lián)系電話 二維碼 意見反饋 在線交流

掃一掃訪問手機商鋪
021-59963601
在線留言