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如何來選擇原代細(xì)胞儀測定的常用熒光染料呢?
閱讀:173 發(fā)布時間:2018-1-291. 原代細(xì)胞抗原的密度
① 高表達(dá)的抗原可選擇幾乎所有的熒光素;
② 低密度表達(dá)的抗原需要可提供較高S/N比值的熒光素如PE/APC。
2. 自發(fā)熒光
① 每種細(xì)胞群都有不同水平的自發(fā)熒光;
② 所有的熒光通道均可觀察到自發(fā)熒光,但自發(fā)熒光強(qiáng)度在波長較長時迅速降低;
③ 對自發(fā)熒光較強(qiáng)的細(xì)胞,選擇發(fā)射波長較長的熒光素(如APC)可得到較好的S/N比值;
④ 對自發(fā)熒光比較弱的細(xì)胞,發(fā)射波長較長的熒光素對S/N提高沒有明顯的改善??蛇x用FITC。
3. 非特異結(jié)合
① 許多熒光抗體可產(chǎn)生低水平的非特異結(jié)合,使陰性細(xì)胞群的熒光超出自發(fā)熒光;
② 非特異結(jié)合由下列因素引起:
單克隆抗體的同型抗體:一些IgG同型抗體可能與一些細(xì)胞上的Fc受體結(jié)合;
所用的熒光素:羰花青染料(如CY3、CY5、CY5.5、CY7)和Tex-Red直標(biāo)的抗體及一些復(fù)合染料標(biāo)記的抗體在標(biāo)記某些亞群的細(xì)胞時有時會提高結(jié)合率;對CY5來說,是因?yàn)樵撊玖吓c低親和力Fc受體的極低親和力相互作用。這也是復(fù)合染料PE-CY5的特性。
4. 復(fù)合染料:小心信號衰退
① 復(fù)合染料因?yàn)楣?、固定劑或溫度升高會致信號衰退,是?fù)合染料在上一級染料處發(fā)光。該種現(xiàn)象從一小部分亞群開始,導(dǎo)致APC或PE染色細(xì)胞群假陽性;
② 減少樣本暴露于光、高溫或固定劑,可很大程度上避免這一問題;
③ 選擇染料時需要考慮:復(fù)合染料的信號衰退會不會降低APC或PE的靈敏度。如果是,就要選擇另外的試劑搭配;
④ 原代細(xì)胞如果樣本需要固定,要選擇穩(wěn)定的固定劑,可有效阻止復(fù)合染料的信號衰退。
L-4-Hydroxyisoleucine HPLC≥98% L-4-羥基異亮氨酸
Secoisolariciresinol Diglucoside HPLC≥98% 亞麻木酚素(SDG)
α-mangostin HPLC≥98% α-倒捻子素
β-mangostin HPLC≥98% β-倒捻子素
3-isomangostin HPLC≥98% 3-異倒捻子素
Cichoric Acid HPLC≥98% 菊苣酸
HPLC≥98% 梭砂貝母堿
Momordin Ic HPLC≥98% 地膚子皂苷Ic
Pectolinarin HPLC≥98% 大薊苷(柳穿魚葉苷)
2"-O-galloylhyperin HPLC≥98% 2”-O-沒食子?;鸾z桃苷
9-methoxycamptothecine HPLC≥98% 9-甲氧基喜樹堿
原代細(xì)胞