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原代細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化的實(shí)驗(yàn)
閱讀:188 發(fā)布時(shí)間:2018-3-7原代細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中正常機(jī)體的T淋巴細(xì)胞在體外培養(yǎng)過程中受到特異性抗原或有絲分裂原刺激。可轉(zhuǎn)化為淋巴母細(xì)胞。細(xì)胞免疫缺陷時(shí),患惡性腫瘤或某些其他疾病時(shí)。轉(zhuǎn)化率顯然降低。目前zui常用植物血凝素(PHA)作為分裂原來檢測受試者的淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率,從而判定其細(xì)胞免疫功能,稱為PHA刺激淋巴細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)。
實(shí)驗(yàn)材料
肝素
試劑、試劑盒
199培養(yǎng)液小牛血清鏈霉素青霉素PHA
儀器、耗材
注射器針頭試管吸管離心機(jī)
實(shí)驗(yàn)步驟
1. 采肝素抗凝血1~2毫升(1毫升血中加肝素20單位)充分混勻。37℃靜置1~2小時(shí)。紅細(xì)胞沉淀后,吸取血漿層并捎帶些紅細(xì)胞。移入另一無菌試管中。計(jì)算白細(xì)胞數(shù)然后2000 rpm 離心10分鐘。棄上清液。用199培養(yǎng)液將沉淀的白細(xì)胞配成1×107/毫升細(xì)胞懸液。
2. 取細(xì)胞懸液0.6毫升(6×106細(xì)胞)加入含有2.4毫升199培養(yǎng)液的培養(yǎng)瓶中。
3. 按每毫升營養(yǎng)液加30 ug PHA加入PHA。
4. 37℃孵育68~72小時(shí)。培養(yǎng)過程中,每天翻動培養(yǎng)瓶1~2次。
5. 培養(yǎng)后。振蕩培養(yǎng)瓶。將細(xì)胞重新懸起,然后移入試管中。
6. 1000 rpm 離心5分鐘。
7. 盡量棄去上清液,將沉淀物混勻,取一滴放在載玻片上,推成血膜(頭、體、尾分明)干燥,用瑞特氏染液染色)鏡檢。
8. 原代細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中計(jì)算淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化率:油鏡下觀察每張玻片的頭、體、尾三段。每段各一縱列(目的是減少推片中細(xì)胞分布不均的誤差)。
9. 每張玻片記數(shù)200~400個(gè)細(xì)胞,計(jì)算轉(zhuǎn)化率其中頭部50~100,體部50~100,尾部100~200細(xì)胞。 一般認(rèn)為轉(zhuǎn)化率的正常值為60~70%
Acetaminophen 對乙酰氨基酚標(biāo)準(zhǔn)品 103-90-2 400mg
8-Bromotheophylline 8-溴茶堿標(biāo)準(zhǔn)品 10381-75-6 400mg
ALPHA-乳白蛋白標(biāo)準(zhǔn)品 400mg
氟化牙粉:單氟磷酸鈉/磷酸氫鈣標(biāo)準(zhǔn)品 4.6oz
氟化牙粉:單氟磷酸鈉-碳酸鈣標(biāo)準(zhǔn)品 4.6oz
氟化牙粉:氟化鈉/二氧化硅標(biāo)準(zhǔn)品 4.5oz
Methyl Alcohol 甲醇標(biāo)準(zhǔn)品 67-56-1 3x1.5ml
Diethanolamine 二乙醇胺標(biāo)準(zhǔn)品 111-42-2 3ml
三乙醇胺標(biāo)準(zhǔn)品 102-71-6 3ml
帕立骨化醇溶液標(biāo)準(zhǔn)品 3ml
曲沃前列素標(biāo)準(zhǔn)品 3ml
Potassium Bitartrate (AS) 酒石酸氫鉀標(biāo)準(zhǔn)品 868-14-4 3g
原代細(xì)胞