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細胞系自動化篩選技術
閱讀:101 發(fā)布時間:2018-3-30zui常用的細胞系方法是檢測96孔細胞培養(yǎng)板中蛋白的濃度;另外一個方法是讓細胞在軟瓊脂上生長形成集落,然后利用原位免疫沉淀技術獲得高產(chǎn)細胞。近年來,發(fā)展起來的高通量自動化篩選技術也被受關注。
為實現(xiàn)克隆的高表達,在有些情況下外源基因擴增,比如以CHO用作宿主細胞;有些情況則不需要,比如雜交瘤細胞。為了實現(xiàn)外源基因的擴增,將細胞在高濃度的擴增標記(比如dhfr)抑制劑的壓力下生長。細胞存活需要擴增標記。高濃度的抑制劑能夠殺死除擁有多個擴增標記基因以外的絕大多數(shù)細胞。在標記基因擴增的過程中,與它相鄰的基因也隨之發(fā)生擴增?;蚩截悢?shù)的增加導致轉錄和翻譯水平的提高。在這個過程中,某些高產(chǎn)細胞株重組IgG重鏈的轉錄水平成為細胞內(nèi)zui高。另一方面,過高的蛋白表達可能會超過細胞內(nèi)蛋白折疊的限度,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中發(fā)生未折疊蛋白效應導致細胞凋亡。因此沒有建立起與高表達相匹配的其它結構的細胞可能不能存活。
基因擴增后的細胞既含有多個拷貝的外源基因,能高水平的表達目的基因和抗性基因,還具備了強大的蛋白分泌能力。除此之外,高產(chǎn)細胞株還應具備高密度培養(yǎng)和能維持較長平臺期的能力。
基因擴增后的細胞可以視為一個細胞“Pool”,其中含有眾多不同遺傳背景的細胞,或是基因插入位點的不同,或是擴增程度的不同等等。因此基因擴增后下一步是細胞的單克隆化。單克隆化是利用流式細胞儀或有限稀釋法或其他自動化方式(0.2個細胞/孔)將細胞接種到多孔板中??梢哉J為從某一特定孔里長出的細胞都是由早期的一個細胞分裂而來,他們在遺傳上是同源的。
單克隆化后需要對獲得的細胞系進行初步的評價。主要包括生長特性,產(chǎn)品質(zhì)量的評價。有些情況下需要將細胞馴化到更接近模式的條件下,進行培養(yǎng)。
3x1.5ml Methyl Alcohol 67-56-1 甲醇標準品
4.5oz 氟化牙粉:氟化鈉/二氧化硅標準品
4.6oz 氟化牙粉:單氟磷酸鈉-碳酸鈣標準品
4.6oz 氟化牙粉:單氟磷酸鈉/磷酸氫鈣標準品
400mg Zidovudine 30516-87-1 齊多夫定標準品
400mg Trehalose 6138-23-4 海藻糖標準品
400mg Tilmicosin 108050-54-0 替米考星標準品
400mg Sucralose 56038-13-2 三氯蔗糖標準品
400mg Sodium Starch Glycolate Type B 9063-38-1 羧甲基淀粉鈉標準品(B型)
400mg Sodium Starch Glycolate Type A 9063-38-1 羧甲基淀粉鈉標準品(A型)
400mg Quinapril Hydrochloride 82586-55-8 鹽酸喹那普利標準品
400mg Octisalate (Octyl Salicylate) 118-60-5 水楊酸乙基己酯標準品
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