原代細(xì)胞因子溶解操作方法及注意事項(xiàng)

原代細(xì)胞所供應(yīng)的PeproTech細(xì)胞因子中不含載體蛋白（Carrier Protein）或其他添加劑（如BSA、HAS或蔗糖等），并且通常以zui少量的鹽來進(jìn)行凍干處理，因此微量的細(xì)胞因子在凍干過程中會(huì)沉積于管內(nèi)，形成很薄或不可見的蛋白層。所以我們建議在收到產(chǎn)品后，務(wù)必在開蓋前先離心，使粘在管蓋或管壁上的蛋白聚集于管底（此時(shí)能否見到白色沉淀均屬正?，F(xiàn)象）。
1．離心：高速離心 (10, 000 rpm) 20-30 秒，或低速離心 (2, 000 rpm) 5 分鐘。
2．溶解（Reconstitution）：用去離子水或其它緩沖液（根據(jù)說明書要求進(jìn)行選擇）溶解至說明書要求的濃度 (一般為 0.1-1.0 mg/mL，如10ug的產(chǎn)品，需用10uL-100uL的去離子水或緩沖液溶解)。溶解時(shí)不可振蕩，避免因化學(xué)鍵的斷裂造成蛋白失活，可加入適當(dāng)?shù)娜軇┹p搖并靜置一段時(shí)間，待細(xì)胞因子*溶解后使用。溶劑的選擇：
1）要求用去離子水溶解的產(chǎn)品，務(wù)必不可用鹽溶液，避免過高的鹽濃度造成蛋白不可逆的析出；
2) 要求用鹽溶液溶解的產(chǎn)品，請(qǐng)依照說明書上的濃度，同樣也是為了避免過高的鹽濃度。
3．分裝和貯存（Aliquot and Storage）：蛋白溶解后可根據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)需要進(jìn)一步稀釋成工作液，稀釋可用RPMI 1640、DMEM或PBS等溶液，其中含有5-10%的FCS （小?；蛱ヅＱ澹┗?.5 %的BSA（牛血清白蛋白）來穩(wěn)定蛋白。工作液在4℃可保存1周，如需長(zhǎng)期保存，則需分裝凍存于-20℃ （注意：不可凍存于-80℃）。分裝時(shí)每管中工作液的體積是一次實(shí)驗(yàn)的用量，以實(shí)現(xiàn)每次實(shí)驗(yàn)用完一只工作液，原代細(xì)胞避免反復(fù)凍融引起蛋白活性的降低。
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