嘌呤核苷磷酸化酶(PNP)重組蛋白 返回列表頁

公司產(chǎn)品僅供科研實驗產(chǎn)品屬性：

產(chǎn)品名稱：嘌呤核苷磷酸化酶(PNP)重組蛋白   

物種：Homo sapiens (Human，人)

英文名稱：Recombinant Purine Nucleoside Phosphorylase (PNP)

NP; PUNP; Nucleoside Phosphorylase; Inosine phosphorylase; Inosine-guanosine phosphorylase

酶與激酶

相關(guān)產(chǎn)品：
磷脂酰肌醇-4-激酶α(PI4Ka)重組蛋白英文名稱：Recombinant Phosphatidylinositol-4-Kinase Catalytic Alpha (PI4Ka)Homo sapiens (Human，人)

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磷酯酶Cγ1(PLCg1)重組蛋白英文名稱：Recombinant Phospholipase C Gamma 1 (PLCg1)Homo sapiens (Human，人)

標(biāo)簽選擇：

親和標(biāo)簽：蛋白重組表達(dá)過程中采用親和標(biāo)簽融合表達(dá)有兩方面的作用：一方面是為了使蛋白純化過程變得更加容易；另一方面是為了促進(jìn)某些不溶性蛋白可溶。蛋白標(biāo)簽可分兩類：一類是短肽類標(biāo)簽；一類是長肽以融合蛋白（fused partner）形式共表達(dá)。使用不同的蛋白標(biāo)簽需要根據(jù)具體案例來分析。

不同的系統(tǒng)步驟稍微有些不同的，大致步驟如下：

真核表達(dá)系統(tǒng)的重組蛋白表達(dá)步驟：

a.      選擇表達(dá)載體和宿主細(xì)胞（常用的CHO和HEK293）

b.      表達(dá)載體的構(gòu)建

c.      無內(nèi)毒素的質(zhì)粒抽提

d.      細(xì)胞瞬時轉(zhuǎn)染

e.      表達(dá)小試，條件優(yōu)化

f.       表達(dá)分析和鑒定（SDS-PGAE和WB）

g.      大量表達(dá)

h.      親和純化

i.        檢測和鑒定

原核表達(dá)系統(tǒng)的重組蛋白表達(dá)步驟：

a.      選擇表達(dá)載體

b.      密碼子優(yōu)化

c.      基因合成/亞克隆

d.      轉(zhuǎn)化表達(dá)菌株

e.      蛋白表達(dá)小試分析

f.       如果蛋白可溶，蛋白親和純化

g.      如果蛋白不可溶，則需要變復(fù)性來制備可溶蛋白。

h.      鑒定，包括SDS-PAGE和WB鑒定

GZMH蛋白；表達(dá)蛋白的分析、純化、檢測

　　誘導(dǎo)表達(dá)成功后，表達(dá)蛋白的分析、純化、檢測應(yīng)該順當(dāng)，按一般的實驗步驟做沒太大的問題。

操作步驟 ：

根據(jù)使用量，取每 1mL RIPA 加入 10uL PMSF，使 PMSF 的zui終濃度為 1mM?；靹騻溆茫≒MSF 現(xiàn)用現(xiàn)加）。

1、樣品前處理：

a)對于貼壁細(xì)胞：去除培養(yǎng)液，用 PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍。按照 6 孔板每孔細(xì)胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下，使裂解液和細(xì)胞充分接觸。

b)對于懸浮細(xì)胞：離心收集細(xì)胞，用手指把細(xì)胞用力彈散。按照6孔板每孔細(xì)胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液，再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞。充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細(xì)胞沉淀。如果細(xì)胞量較多，必需分裝成 50-100 萬細(xì)胞/管，然后再裂解。

c)對于組織樣品： 把切成細(xì)小的碎片。按照每 20mg 組織加入 150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當(dāng)減少裂解液的用量)。用玻璃勻漿器勻漿，直至充分裂解。

2、后處理：

將裂解后的樣品 10000-14000g 離心 3-5 分鐘，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的蛋白濃度測定、SDS-PAGE、Western blotting 和免疫沉淀等操作

特點：

標(biāo)記：標(biāo)記反應(yīng)簡單、溫和且很少抑制抗體活性，將與抗體共價結(jié)合是一種非常簡便、直接的標(biāo)記方法。

酶標(biāo)記：酶標(biāo)記抗體是將酶與特異性抗體經(jīng)適當(dāng)方法連接而成，其應(yīng)用范圍非常廣泛，結(jié)果即時可見、敏感性高。

熒光標(biāo)記：熒光基團AbFluorTM是新型的熒光標(biāo)記物之一，產(chǎn)品覆蓋350-770nm。不同的AbFluor基團經(jīng)恰當(dāng)?shù)募す饪砂l(fā)光， 從而得知抗體的定位和待測抗原的分布情況，主要用于細(xì)胞分選或高分辨率免疫染色，是一種非常好的亞細(xì)胞水平定位的方法。

Protein atonal homolog 8產(chǎn)品名稱: 螺旋環(huán)螺旋轉(zhuǎn)錄因子HATH6抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Dog, Pig, Cow, Rabbit, Sheep

Vesicle docking protein p115產(chǎn)品名稱: 囊泡對接蛋白p115抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Chicken, Pig, Cow, Horse, Sheep

GSE1產(chǎn)品名稱: 基因元件1抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat

應(yīng)用類型: Other英文名稱: EIF2S1英文別名: EIF2A; CDA 02; CDA02; eIF 2 alpha; EIF 2; EIF 2A; EIF-2alpha; EIF2; EIF2alpha; eIF2S1; Eukaryotic Translation Initiation Factor 2 alpha; Eukaryotic translation initiation factor 2 subunit 1 alpha 35kDa; Eukaryotic translation initiation factor 2 subunit alpha; IF2A_HUMAN.

SDS/Serine dehydratase產(chǎn)品名稱: 絲氨suan脫水meiSDS抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Rabbit, Sheep

Cystatin-C產(chǎn)品名稱: 胱抑suC單克隆抗體交叉反應(yīng): (predicted: Human)

AGXT產(chǎn)品名稱: 丙氨suansuan轉(zhuǎn)氨mei單克隆抗體交叉反應(yīng): Human

RNF105產(chǎn)品名稱: 環(huán)指蛋白105抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat

Caseine Kinase 1 alpha產(chǎn)品名稱: 酪蛋白激meicasein kinase Iα抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Cow, Horse, Rabbit, Sheep

Progesterone Receptor產(chǎn)品名稱: 孕激su受體單克隆抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat
嘌呤核苷磷酸化酶(PNP)重組蛋白人沉默調(diào)節(jié)蛋白2(SIRT2)ELISA試劑盒SIRT2沉默調(diào)節(jié)蛋白2elisa kitHuman Sirtuin 2(SIRT2)ELISA Kit

人叉頭框蛋白P1(FOXP1)ELISA試劑盒FOXP1叉頭框蛋白P1elisamei聯(lián)免疫試劑盒Human Forkhead Box Protein P1(FOXP1)ELISA Kit

人叉頭框蛋白C1(FOXC1)ELISA試劑盒FOXC1叉頭框蛋白C1elisa檢測試劑盒Human Forkhead Box Protein C1(FOXC1)ELISA Kit

人層粘連蛋白γ3(LAMγ3)ELISA試劑盒LAMγ3層粘連蛋白γ3elisa kitHuman Laminin Gamma 3(LAMC3)ELISA Kit

人層粘連蛋白γ2(LAMγ2)ELISA試劑盒LAMγ2層粘連蛋白γ2ELISA試劑盒Human Laminin Gamma 2(LAMC2)ELISA Kit