產(chǎn)品名稱:Asp-2基因修飾;;FC33
規(guī)格:1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶
貨號(hào):YS-02X9847
細(xì)胞生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn) :細(xì)胞生長(zhǎng)良好,形態(tài)正常
儲(chǔ)存條件:2℃-8℃,避光儲(chǔ)存
運(yùn)輸條件:冰袋冷藏運(yùn)輸
公司產(chǎn)品僅用于科研
細(xì)胞培養(yǎng)步驟
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1) 準(zhǔn)備RPMI-1640 培養(yǎng)基;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%;Glutamax(invitrogen 35050061),1%;Sodium pyruvate(invitrogen 11360070),1%;雙抗,1%。
2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。
二. 細(xì)胞處理:
1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入250px皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過(guò)夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
注意事項(xiàng):
(1)凍存前細(xì)胞狀態(tài),細(xì)胞最好在對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期,細(xì)胞密度適合,剛剛發(fā)生細(xì)胞融合,過(guò)密或連成片的細(xì)胞狀態(tài)不好,而且消化時(shí)不容易分散;
(2)凍存的密度不宜過(guò)低,10的6次方-7次方的數(shù)量級(jí)比較好,我凍存的細(xì)胞一般T25培養(yǎng)瓶(5*107),一瓶?jī)鲆还埽?.5ml凍存管),10cm培養(yǎng)皿(大概10的8次方個(gè)細(xì)胞)分成兩管。
(3)消化和吹打,切忌胰酶消化過(guò)度,吹打不可太用力,最好不要吹出好多泡泡。消化后立即加入*培養(yǎng)基吹打哦,不是加入凍存液再吹打。
(4)離心后加入凍存液。凍存液中FBS的用量對(duì)于腫瘤細(xì)胞株而言要求不是很嚴(yán)格,我從10%-90%都用過(guò),問(wèn)題不大,個(gè)人認(rèn)為10%-20%可以了,能節(jié)約處就節(jié)約點(diǎn)嘛!另外,凍存液可以在處理細(xì)胞前配置,放在4度冰箱預(yù)冷。細(xì)胞離心后直接用預(yù)冷的凍存液重懸,移入凍存管。
(5)關(guān)于“慢凍",傳統(tǒng)的方法,LLC細(xì)胞凍存管用棉花包好,4度2h,-20度2h或更長(zhǎng),-80度過(guò)夜,最后液氮。對(duì)于條件較好的實(shí)驗(yàn)室和細(xì)胞凍存數(shù)量多的實(shí)驗(yàn)室,推薦使用程序降溫盒,內(nèi)裝異丙醇,在-80度并內(nèi)可以逐漸降溫,很方便,省了包棉花、4度、-20度了。
使用步驟:
一)準(zhǔn)確稱量試劑:根據(jù)不同的菌類和用途,選擇適宜的培養(yǎng)基,培養(yǎng)基所需試劑必須純凈。
(二)校正pH值:將稱量好的培養(yǎng)基各種成分放入容器內(nèi),標(biāo)記劃線,加熱溶解,補(bǔ)充水分,測(cè)定酸堿度,常用pH6.8~8.0的精密試紙或酸度計(jì)測(cè)定。用1N NaOH和1N HCl調(diào)節(jié)pH值到適宜范圍內(nèi)。
(三)過(guò)濾:將玻璃漏斗置鐵架上,再用人子宮成纖維細(xì)胞*培養(yǎng)基紗布夾棉花或用濾紙放在漏斗中,將上述培養(yǎng)基倒入其中過(guò)濾至透明。
(四)分裝:將過(guò)濾后的培養(yǎng)基分裝于中試管或三角瓶?jī)?nèi)(試管內(nèi)每支裝5mL;三角瓶中裝100~150ml),塞好棉塞用牛皮紙包扎好,準(zhǔn)備滅菌。
(五)滅菌:培養(yǎng)基的滅菌,常用高壓蒸汽滅菌法。一般微生物的營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞在水中煮沸后即被殺死,但細(xì)菌的芽胞有較強(qiáng)的抗熱性,須經(jīng)高壓蒸汽滅菌才能達(dá)到*滅菌的目的。根據(jù)蒸汽溫度隨壓力升高而上升的原理,即壓力越大,蒸汽溫度就越高。因此,在同一溫度條件下,采用高壓蒸汽滅菌比干熱滅菌法效果要好。而且在濕熱情況下,菌體吸收水分后,其蛋白質(zhì)易于凝固變性,因?yàn)檎羝拇┩噶?qiáng),殺菌效果好。
細(xì)胞特性:
1)】組織來(lái)源于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的正常眼組織。
2)細(xì)胞鑒定:細(xì)胞免疫熒光染色為陽(yáng)性。
3)經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。
4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。
5)細(xì)胞生長(zhǎng)方式:上皮樣,不規(guī)則細(xì)胞,貼壁培養(yǎng)。
AT1R/RBITC 紅色羅丹明標(biāo)記血管緊張素Ⅱ-1型受體抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2mg
CSIG(cellular senescence inhibited gene) 細(xì)胞衰老抑制基因抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
整合素樣金屬蛋白酶與凝血酶1型-12抗體 ADAM-TS12 0.1ml
ZAR1L 英文名稱: 受精卵抑制蛋白1樣蛋白抗體 0.2ml
Dishevelled 2 英文名稱: 蓬亂蛋白2抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh phospho-FAS (Tyr232) 磷酸化載脂蛋白A1抗體 規(guī)格 0.1ml
CSIG(cellular senescence inhibited gene) 細(xì)胞衰老抑制基因抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
TLR4/CD284 (Toll-like receptor 4) Toll樣受體4抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
CA125 卵巢癌抗原抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Rhesus antibody Rh PDLIM3/ALP 輔肌動(dòng)蛋白相關(guān)LIM蛋白抗體 規(guī)格 0.2ml
Calretinin (CR)鈣結(jié)合蛋白1:150-200 濃縮液 0.1ml 進(jìn)口分裝
TFPI-2 英文名稱: 組織因子途徑抑制劑-2抗體 0.1ml
Phospho-CRMP2 (Thr514) 英文名稱: 磷酸化二氫嘧啶酶樣2抗體 0.1ml
CA125 卵巢癌抗原抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Rabbit Bovine IgM/PE-Cy5.5 PE-Cy5.5標(biāo)記的兔抗IgM 0.1ml
FUT8 英文名稱: 巖藻糖轉(zhuǎn)移酶8抗體 0.2ml
抗眼鏡蛇蛇毒蛋白抗體 Glasses Snake poison Protein 0.2ml
phospho-c-Jun (Ser63) /FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化原癌基因c-Jun抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Phospho-SirT1 (Ser27) 磷酸化沉默調(diào)節(jié)蛋白1抗體 規(guī)格 0.1ml
Rabbit FITC 兔抗熒光素 (親和層析純化)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Asp-2基因修飾;;FC33活體細(xì)胞線粒體內(nèi)膜功能/膜電位測(cè)定試劑盒20次小鼠胰島素(INS)ELISA試劑盒,
*線粒體內(nèi)膜功能/膜電位測(cè)定試劑盒20次小鼠凝血酶受體(TR)ELISA試劑盒,
活體組織線粒體內(nèi)膜功能/膜電位測(cè)定試劑盒10次Ⅰ型前膠原N端前肽(PⅠNP)ELISA試劑盒--動(dòng)物,人
/酵母細(xì)胞線粒體內(nèi)膜功能/膜電位測(cè)定試劑盒20次丁型肝炎IgG(HDV IgG)ELISA試劑盒--動(dòng)物,人
凍切片線粒體內(nèi)膜功能/膜電位測(cè)定試劑盒20次抗類缺陷病抗體(HIV)ELISA試劑盒--動(dòng)物,人
線粒體外膜功能檢測(cè)試劑盒20次布氏瓊脂 用于彎曲桿菌分離(SN標(biāo)準(zhǔn))
純化線粒體氧化酶活性測(cè)定試劑盒20次改良番茄汁培養(yǎng)基 用于食品中乳酸菌總數(shù)測(cè)定
細(xì)胞樣品氧化酶活性測(cè)定試劑盒20/50/100次乳酸桿菌選擇性瓊脂用于乳酸菌檢測(cè)和分離培養(yǎng)(ACUMEDIA)
組織樣品氧化酶活性測(cè)定試劑盒20次小鼠大內(nèi)皮素(Big ET)ELISA試劑盒,
純化氧化酶活性測(cè)定試劑盒20次小鼠缺血修飾白蛋白(IMA)ELISA試劑盒,
/酵母氧化酶活性測(cè)定試劑盒20次Ⅲ型膠原(Col Ⅲ)ELISA試劑盒--動(dòng)物,人
植物氧化酶活性測(cè)定試劑盒20次抗丙型肝炎病抗體(anti-HCV)ELISA試劑盒--動(dòng)物,人
線粒體功能詹納斯綠B(JGB)染色試劑盒20次人肺癌標(biāo)志物ELISA試劑盒,
純化線粒體氧化應(yīng)活性氧(ROS)魯米諾化學(xué)發(fā)光法定量檢測(cè)試劑盒50次小鼠血清總補(bǔ)體(CH50)ELISA試劑盒,
純化線粒體氧化應(yīng)活性氧(ROS)光澤精化學(xué)發(fā)光法定量檢測(cè)試劑盒50次大鼠血管舒緩肽(BK)ELISA試劑盒,