詳細介紹
產(chǎn)品名稱:大鼠肝動脈內(nèi)皮細胞*培養(yǎng)基
規(guī)格:100mL/125mL×4
貨號:YS-02X10143
細胞生長實驗 :細胞生長良好,形態(tài)正常
儲存條件:2℃-8℃,避光儲存
運輸條件:冰袋冷藏運輸
公司產(chǎn)品僅用于科研
細胞培養(yǎng)步驟
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1) 準備RPMI-1640 培養(yǎng)基;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%;Glutamax(invitrogen 35050061),1%;Sodium pyruvate(invitrogen 11360070),1%;雙抗,1%。
2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。
二. 細胞處理:
1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓毎麘乙杭尤?50px皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
注意事項:
(1)凍存前細胞狀態(tài),細胞最好在對數(shù)生長期,細胞密度適合,剛剛發(fā)生細胞融合,過密或連成片的細胞狀態(tài)不好,而且消化時不容易分散;
(2)凍存的密度不宜過低,10的6次方-7次方的數(shù)量級比較好,我凍存的細胞一般T25培養(yǎng)瓶(5*107),一瓶凍一管(1.5ml凍存管),10cm培養(yǎng)皿(大概10的8次方個細胞)分成兩管。
(3)消化和吹打,切忌胰酶消化過度,吹打不可太用力,最好不要吹出好多泡泡。消化后立即加入*培養(yǎng)基吹打哦,不是加入凍存液再吹打。
(4)離心后加入凍存液。凍存液中FBS的用量對于細胞而言要求不是很嚴格,我從10%-90%都用過,問題不大,個人認為10%-20%可以了,能節(jié)約處就節(jié)約點嘛!另外,凍存液可以在處理細胞前配置,放在4度冰箱預冷。細胞離心后直接用預冷的凍存液重懸,移入凍存管。
(5)關(guān)于“慢凍",傳統(tǒng)的方法,細胞凍存管用棉花包好,4度2h,-20度2h或更長,-80度過夜,最后液氮。對于條件較好的實驗室和細胞凍存數(shù)量多的實驗室,推薦使用程序降溫盒,內(nèi)裝異丙醇,在-80度并內(nèi)可以逐漸降溫,很方便,省了包棉花、4度、-20度了。
使用步驟:
一)準確稱量試劑:根據(jù)不同的菌類和用途,選擇適宜的培養(yǎng)基,培養(yǎng)基所需試劑必須純凈。
(二)校正pH值:將稱量好的培養(yǎng)基各種成分放入容器內(nèi),標記劃線,加熱溶解,補充水分,測定酸堿度,常用pH6.8~8.0的精密試紙或酸度計測定。用1N NaOH和1N HCl調(diào)節(jié)pH值到適宜范圍內(nèi)。
(三)過濾:將玻璃漏斗置鐵架上,再用培養(yǎng)基紗布夾棉花或用濾紙放在漏斗中,將上述培養(yǎng)基倒入其中過濾至透明。
(四)分裝:將過濾后的培養(yǎng)基分裝于中試管或三角瓶內(nèi)(試管內(nèi)每支裝5mL;三角瓶中裝100~150ml),塞好棉塞用牛皮紙包扎好,準備滅菌。
(五)滅菌:培養(yǎng)基的滅菌,常用高壓蒸汽滅菌法。一般微生物的營養(yǎng)細胞在水中煮沸后即被殺死,但細菌的芽胞有較強的抗熱性,須經(jīng)高壓蒸汽滅菌才能達到*滅菌的目的。根據(jù)蒸汽溫度隨壓力升高而上升的原理,即壓力越大,蒸汽溫度就越高。因此,在同一溫度條件下,采用高壓蒸汽滅菌比干熱滅菌法效果要好。而且在濕熱情況下,菌體吸收水分后,其蛋白質(zhì)易于凝固變性,因為蒸汽的穿透力強,殺菌效果好。
細胞特性:
1)】組織來源于實驗動物的正常眼組織。
2)細胞鑒定:細胞免疫熒光染色為陽性。
3)經(jīng)鑒定細胞純度高于90%。
4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌。
5)細胞生長方式:上皮樣,不規(guī)則細胞,貼壁培養(yǎng)。
F VIII Ag ELISA Kit 大鼠第八因子相關(guān)抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
XAF1 XIAP相關(guān)因子1凋亡抑制蛋白抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Rhesus antibody Rh G Protein alpha Inhibitor 1 G蛋白α抑制蛋白1抗體 規(guī)格 0.2ml
BMP-6 ELISA Kit 大鼠骨形成蛋白6 96T
Neurexin 2 英文名稱: 軸突蛋白2抗體 0.2ml
APRG1 英文名稱: 三號染色體開放閱讀框抗體 0.2ml
XAF1 XIAP相關(guān)因子1凋亡抑制蛋白抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Osteocalcin 小鼠骨鈣素Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Apo B 載脂蛋白B抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Rhesus antibody Rh Mouse rat IgG/Bio 生物素標記的小鼠抗大鼠IgG 規(guī)格 0.1ml
APCR(Human activated protein C resistance) ELISA Kit 人活化蛋白C抵抗素 96T
SLAP 英文名稱: SLAP蛋白抗體 0.1ml
C6orf192 英文名稱: 8號染色體開放閱讀框192抗體 0.2ml
Apo B 載脂蛋白B抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Goat Chicken IgG/FITC FITC標記的羊抗雞IgG 0.3ml
FJX1 英文名稱: 四連接同源蛋白FJX1抗體 0.2ml
骨保護蛋白/骨鈣素抗體 BGP 0.1ml
NK-1/Substance P Receptor /FITC 熒光素標記P物質(zhì)受體抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh PPM1B 蛋白質(zhì)磷酸酶1B抗體(PP2Cβ) 規(guī)格 0.2ml
WNK3 protein/FITC 熒光素標記絲/蘇激酶家族成員的基因WNK3抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
大鼠肝動脈內(nèi)皮細胞*培養(yǎng)基高質(zhì)敏感比色法定量檢測試劑盒人包蟲抗體IgG Elisa測定試劑盒
組織NADPH還原酶(NADPH Cytochrome C Reductase)活性20次石斛LAMP鑒定試劑盒
高質(zhì)敏感比色法定量檢測試劑盒鴉膽子LAMP鑒定試劑盒
β-葡萄糖醛酸酶(β-glucuronidase)活性比色法定量檢測試劑盒20次地榆LAMP鑒定試劑盒
羧酸酯酶(carboxylesterase)活性比色法定量檢測試劑盒20次人神經(jīng)特異性烯醇化酶(NSE)Elisa測定試劑盒
細胞谷氨酰半胱合成酶(glutamyl systeine synthetase)活性比色法定量檢測試劑盒20次柿蒂探針法PCR鑒定試劑盒
組織谷氨酰半胱合成酶(glutamyl systeine synthetase)活性比色法定量檢測試劑盒20次小茴香探針法PCR鑒定試
植物谷氨酰半胱合成酶(glutamyl systeine synthetase)活性比色法定量檢測試劑盒20次人凝血因子Ⅸ(FⅨ)Elisa測定試劑盒
植物硝酸鹽還原酶活性比色法定量檢測試劑盒20次制何首烏染料法PCR鑒定試劑盒
/酵母細胞硝酸鹽還原酶活性比色法定量檢測試劑盒20次枳實染料法PCR鑒定試劑盒
藻類細胞硝酸鹽還原酶活性比色法定量檢測試劑盒20次小鼠白介素16(IL-16)Elisa測定試劑盒
植物亞硝酸鹽還原酶總活性比色法定量檢測試劑盒20次小鼠纖溶酶抗纖溶酶復合物(PAP)Elisa測定試劑盒
/酵母細胞亞硝酸鹽還原酶總活性比色法定量檢測試劑盒20次大鼠巨噬炎癥蛋白5(MIP-5)Elisa測定試劑盒
藻類細胞亞硝酸鹽還原酶總活性比色法定量檢測試劑盒20次大鼠β素(BTC)Elisa測定試劑盒
植物鐵型亞硝酸鹽還原酶活性比色法定量檢測試劑盒20次大鼠血管生長素(ANG)Elisa測定試劑盒