直結(jié)腸平滑肌細(xì)胞*培養(yǎng)基

直結(jié)腸平滑肌細(xì)胞*培養(yǎng)基公司正在銷售的產(chǎn)品：蓬亂蛋白1抗體Anti-CNR-2/FITC 熒光素標(biāo)記鈣粘蛋白相關(guān)的神經(jīng)受體2抗體IgG
肌Dystrobrevin β蛋白抗體Anti-CNTF/FITC 熒光素標(biāo)記睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子抗體IgG
異常凝血酶原/脫-γ-羧基凝血酶原抗體Anti-CNTFR Alpha/FITC 熒光素標(biāo)記抗睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子受體α抗體IgG
結(jié)蛋白抗體Anti-C

產(chǎn)品名稱：直結(jié)腸平滑肌細(xì)胞*培養(yǎng)基

規(guī)格：100mL/125mL×4
貨號(hào)：YS-02X10011

細(xì)胞生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn) ：細(xì)胞生長(zhǎng)良好，形態(tài)正常

儲(chǔ)存條件：2℃-8℃，避光儲(chǔ)存

運(yùn)輸條件：冰袋冷藏運(yùn)輸
公司產(chǎn)品僅用于科研

細(xì)胞特性：

1)】組織來源于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的正常眼組織。

2)細(xì)胞鑒定：細(xì)胞免疫熒光染色為陽性。

3)經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。

5)細(xì)胞生長(zhǎng)方式：上皮樣，不規(guī)則細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。

 

細(xì)胞培養(yǎng)步驟

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1） 準(zhǔn)備RPMI-1640 培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；Glutamax（invitrogen 35050061），1%；Sodium pyruvate（invitrogen 11360070），1%；雙抗，1%。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二． 細(xì)胞處理：

1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入250px皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

注意事項(xiàng)：

（1）凍存前細(xì)胞狀態(tài)，細(xì)胞最好在對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，細(xì)胞密度適合，剛剛發(fā)生細(xì)胞融合，過密或連成片的細(xì)胞狀態(tài)不好，而且消化時(shí)不容易分散；

（2）凍存的密度不宜過低，10的6次方-7次方的數(shù)量級(jí)比較好，我凍存的細(xì)胞一般T25培養(yǎng)瓶（5*107），一瓶?jī)鲆还埽?.5ml凍存管），10cm培養(yǎng)皿（大概10的8次方個(gè)細(xì)胞）分成兩管。

（3）消化和吹打，切忌胰酶消化過度，吹打不可太用力，最好不要吹出好多泡泡。消化后立即加入*培養(yǎng)基吹打哦，不是加入凍存液再吹打。

（4）離心后加入凍存液。凍存液中FBS的用量對(duì)于腫瘤細(xì)胞株而言要求不是很嚴(yán)格，我從10%-90%都用過，問題不大，個(gè)人認(rèn)為10%-20%可以了，能節(jié)約處就節(jié)約點(diǎn)嘛！另外，凍存液可以在處理細(xì)胞前配置，放在4度冰箱預(yù)冷。細(xì)胞離心后直接用預(yù)冷的凍存液重懸，移入凍存管。

（5）關(guān)于“慢凍"，傳統(tǒng)的方法，LLC細(xì)胞凍存管用棉花包好，4度2h，-20度2h或更長(zhǎng)，-80度過夜，最后液氮。對(duì)于條件較好的實(shí)驗(yàn)室和細(xì)胞凍存數(shù)量多的實(shí)驗(yàn)室，推薦使用程序降溫盒，內(nèi)裝異丙醇，在-80度并內(nèi)可以逐漸降溫，很方便，省了包棉花、4度、-20度了。

PTEN/MMAC1 /FITC 熒光素標(biāo)記一種抑制基因抗體(C端)IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

BSA (bovine serum albumin) 血清白蛋白Multi-class antibodies規(guī)格： 5g

胰島素受體底物-1抗體  IRS-1 0.2ml

Goat  human IgG whole serum 羊抗人IgG抗血清 1ml

Fructose 6 Phosphate Kinase 英文名稱： 6磷酸果糖激酶抗體 0.1ml

Rhesus antibody Rh phospho-PRKCA(Thr637) 磷酸化蛋白激酶C抗體 規(guī)格 0.1ml

BSA (bovine serum albumin) 血清白蛋白Multi-class antibodies規(guī)格： 5g

BrdU(Human Bromodeoxyuridine) ELISA Kit 人溴脫氧核苷尿嘧啶Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

 PIWIL1 piwi樣1蛋白抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh HIPK3 Fas相互作用蛋白激酶3抗體 規(guī)格 0.2ml

OVA sIgG(Human ovalbumin specific IgG) ELISA Kit 人卵清蛋白特異性IgG 96T

STK18 英文名稱： 絲酸/蘇酸蛋白激酶18 0.2ml

Connexin-37 英文名稱： 間隙連接蛋白37抗體 0.1ml

 PIWIL1 piwi樣1蛋白抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

Mouse  rabbit IgG/PE-CY5 PE-CY5標(biāo)記的小鼠抗兔IgG 0.1ml

Phospho-FAK (Tyr397) 英文名稱： 磷酸化粘著斑激酶抗體 0.1ml

抗IV型膠原抗體  Collagen Ⅳ 0.1ml

 MAP3K8/TPL2/FITC 熒光素標(biāo)記原活化蛋白激酶激酶8抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh PIG3/TP53I3 p53誘導(dǎo)蛋白3抗體 規(guī)格 0.2ml

Goat  mouse IgM/Biotin 生物素化羊抗小鼠IgMMulti-class antibodies規(guī)格： 0.1ml
直結(jié)腸平滑肌細(xì)胞*培養(yǎng)基組蛋白H4乙酰化檢測(cè)試劑盒10/20次等人巨噬來源的趨化因子（MDC/CCL22）ELISA試劑盒,

組蛋白H4-K5乙?；瘷z測(cè)試劑盒10/20次等人6-羥多巴（6-OHDA）ELISA試劑盒, 6-OHDA ELISA kit

組蛋白H4-K8乙酰化檢測(cè)試劑盒10/20次等人降鈣素（CT）ELISA試劑盒,CT ELISA

組蛋白H4-K12乙?；瘷z測(cè)試劑盒10/20次等人骨成型蛋白受體Ⅱ（BMPR-Ⅱ）ELISA試劑盒,BMPR-Ⅱ ELISA

組蛋白H4-K16乙?；瘷z測(cè)試劑盒10/20次等人凋亡相關(guān)半胱肽酶4（Casp4）ELISA試劑盒,

組蛋白H2B-K46甲基化（di）檢測(cè)試劑盒10/20次等人胸腺嘧啶核苷磷酸化酶（TP）ELISA試劑盒,

組蛋白H3-K4（mono/di/tri）甲基化檢測(cè)試劑盒10/20次等人磷酯酶C（PLC）ELISA試劑盒,

組蛋白H3-K9（mono/di/tri）甲基化檢測(cè)試劑盒10/20次等人甲狀腺過氧化物酶（TPO）ELISA試劑盒,

組蛋白H3-K18（mono）甲基化檢測(cè)試劑盒10/20次等人蛋白聚糖（PG）ELISA試劑盒,

組蛋白H3-K23甲基化（mono/di）檢測(cè)試劑盒10/20次等人表面膜球蛋白M（mIgM）ELISA試劑盒,

組蛋白H3-K27（mono/di/tri）甲基化檢測(cè)試劑盒10/20次等人活化蛋白C（APC） ELISA試劑盒,

組蛋白H3-K36（mono/di/tri）甲基化檢測(cè)試劑盒10/20次等人多球蛋白受體（poly-IgR）ELISA試劑盒,

組蛋白H3-K56（mono/di）甲基化檢測(cè)試劑盒10/20次等人晚期糖基化終末產(chǎn)物（AGEs）ELISA試劑盒,

組蛋白H3-K79（mono/di/tri）甲基化檢測(cè)試劑盒10/20次等人視黃酸誘導(dǎo)基因/RIG-1樣受體（RLR）ELISA試劑盒,

組蛋白H3-K122（mono）甲基化檢測(cè)試劑盒10/20次等人絨毛蛋白/埃茲蛋白（CVL）ELISA試劑盒,

使用步驟：

一）準(zhǔn)確稱量試劑：根據(jù)不同的菌類和用途，選擇適宜的培養(yǎng)基，培養(yǎng)基所需試劑必須純凈。

（二）校正pH值：將稱量好的培養(yǎng)基各種成分放入容器內(nèi)，標(biāo)記劃線，加熱溶解，補(bǔ)充水分，測(cè)定酸堿度，常用pH6.8～8.0的精密試紙或酸度計(jì)測(cè)定。用1N NaOH和1N HCl調(diào)節(jié)pH值到適宜范圍內(nèi)。

（三）過濾：將玻璃漏斗置鐵架上，再用人子宮成纖維細(xì)胞*培養(yǎng)基紗布夾棉花或用濾紙放在漏斗中，將上述培養(yǎng)基倒入其中過濾至透明。

（四）分裝：將過濾后的培養(yǎng)基分裝于中試管或三角瓶?jī)?nèi)（試管內(nèi)每支裝5mL；三角瓶中裝100～150ml），塞好棉塞用牛皮紙包扎好，準(zhǔn)備滅菌。

（五）滅菌：培養(yǎng)基的滅菌，常用高壓蒸汽滅菌法。一般微生物的營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞在水中煮沸后即被殺死，但細(xì)菌的芽胞有較強(qiáng)的抗熱性，須經(jīng)高壓蒸汽滅菌才能達(dá)到*滅菌的目的。根據(jù)蒸汽溫度隨壓力升高而上升的原理，即壓力越大，蒸汽溫度就越高。因此，在同一溫度條件下，采用高壓蒸汽滅菌比干熱滅菌法效果要好。而且在濕熱情況下，菌體吸收水分后，其蛋白質(zhì)易于凝固變性，因?yàn)檎羝拇┩噶?qiáng)，殺菌效果好。