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產(chǎn)品簡介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 應用領域 | 化工,生物產(chǎn)業(yè) |
|---|---|---|---|
| 主要用途 | 僅供科研研究實驗 | 英文名稱 | Recombinant Proteasome Subunit Beta Type 4 (PSMb4) |
| 物種 | Homo sapiens (Human，人) | 規(guī)格 | 10μg50μg200μg1mg5mg |
| 品牌 | 研生 |
詳細介紹
蛋白表達及純化：
1.培養(yǎng)500ml哺乳動物細胞，然后將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到細胞中，通過瞬時表達產(chǎn)生目標蛋白。
2.收集含有目標蛋白的部分（細胞或培養(yǎng)上清）。
3.通過親和，離子交換，疏水及凝膠過濾等多種層析方法純化表達的重組蛋白。
4.通過SDS-PAGE電泳檢測每步結(jié)果并控制最終產(chǎn)品質(zhì)量。
5.通過Western-blot驗證目標蛋白正確性。
公司產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于臨床！
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 物種 |
蛋白酶體亞基β4(PSMb4)重組蛋白 | Recombinant Proteasome Subunit Beta Type 4 (PSMb4) | Homo sapiens (Human，人) |
商品介紹：
HN3; HsN3; PROS26; 26 kDa prosomal protein; Multicatalytic endopeptidase complex beta chain; Proteasome beta chain 酶與激酶 物種：Homo sapiens (Human，人) 來源：原核表達 宿主E.coli 內(nèi)毒素水平：<1.0EU/μg(LAL法測定) 亞細胞定位：：細胞質(zhì) 預測分子量：32.9kDa 實際分子量：33kDa(差異分析請參閱說明書) 片段與標簽：Met1~Glu264 with N-terminal His Tag 緩沖液成份：磷酸鹽緩沖液（pH7.4，含有 0.01% SKL, 1mM DTT, 5% Trehalose和Proclin300.） 性狀：凍干粉 純度：> 90% 等電點：5.7 應用：Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB. 規(guī)格10μg50μg200μg1mg5mg |
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操作步驟：
Ⅰ 實體組織蛋白的提取
1． 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制劑， 1 μL蛋白酶抑制劑和 5μL 100mM PMSF，混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。
2． 每100mg固體組織置于培養(yǎng)皿中，剪碎成3mm×3mm左右的小塊，加入0.5～1 mL冷 Lysis Buffer，玻璃勻漿器上下手動勻漿15次，注意低溫操作；
3． 取組織勻漿液轉(zhuǎn)移到1.5mL預冷的離心管，離心10000轉(zhuǎn)/分，4℃離心5 min；
4． 取上清轉(zhuǎn)移至新的預冷的離心管中，即為全蛋白提取物，蛋白定量（Bradford法、BCA法）；
5． 分裝保存于-70℃,避免反復凍融。
Ⅱ 培養(yǎng)細胞蛋白提取
1． 貼壁培養(yǎng)的細胞，吸去培養(yǎng)基后，加入10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS洗兩次，每次振搖數(shù)次以盡量去除培養(yǎng)液；
2． 懸浮培養(yǎng)的細胞或用細胞刮子刮下的貼壁細胞，將細胞及培養(yǎng)液移至離心管中， 1000轉(zhuǎn)/分離心10 min，再用10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS，1000轉(zhuǎn)/分離心5 min洗兩次；
3． 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制劑， 1μL蛋白酶抑制劑和5μL 100mM PMSF，混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。
4． 細胞洗滌后，轉(zhuǎn)至新的預冷的離心管中，加入上述配制好的冷Lysis Buffer，加入量如下表所示：
細胞數(shù)量 | Lysis Buffer加入量 |
107個 | 0.5 mL～1 mL |
5×106個 | 0.2 mL～0.5 mL |
5．置于4℃搖床平臺上，溫和振蕩15 min；
6． 14,000rpm，4℃離心15min，取上清為全蛋白提取物, 蛋白定量（Bradford法、BCA法）；
7． 分裝保存于-70℃,避免反復凍融。
注意事項：
1、不同細胞或組織樣品所需的固定時間有所不同，應當根據(jù)細胞或組織的種類以及組織塊的大小來調(diào)整固定時間。
2、雖然作用溫和，但能硬化組織，固定時間過久會導致組織變脆，切片時易碎。因此固定時間通常不宜超過 24 小時。
3、醛基與抗原蛋白的氨基交聯(lián)形成羧甲基，使抗原決定簇的三維構(gòu)象出現(xiàn)空間障礙。分子間交聯(lián)形成的網(wǎng)格結(jié)構(gòu)可能部分或 掩蓋某些抗原決定簇，使之不能充分暴露，可造成假陰性的染色，影響免疫組化結(jié)果。因此，4%固定的細胞或組織樣品在進行免疫組化檢測時，有時需要對抗原先進行修復，然后才能進行免疫染色等后續(xù)操作。
4、本產(chǎn)品對人體有害，操作時請小心，并注意有效防護以避免直接接觸人體或吸入體內(nèi)。
5、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作
NKD2產(chǎn)品名稱: NKD2蛋白抗體交叉反應: Human, Mouse, Rat
VDAC產(chǎn)品名稱: 等電壓依賴性陰離子通道抗體交叉反應: Human, Mouse, Rat, Chicken, Cow, Horse, Rabbit, Sheep
TNNC2產(chǎn)品名稱: 肌鈣蛋白C2抗體交叉反應: Human, Mouse, Rat, Pig, Cow, Horse, Rabbit, Sheep
DDIT3產(chǎn)品名稱: GADD153抗體交叉反應: Human, Mouse, Rat
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FAM116A產(chǎn)品名稱: FAM116A蛋白抗體交叉反應: Human, Mouse, Rat, Pig, Cow, Horse, Rabbit, Sheep
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蛋白酶體亞基β4(PSMb4)重組蛋白人Akirin人2蛋白(AKIRIN2)ELISA試劑盒AKIRIN2Akirin2蛋白ELISA試劑盒Human Akirin 2(AKIRIN2)ELISA Kit
人Akirin人1蛋白(AKIRIN1)ELISA試劑盒AKIRIN1Akirin1蛋白elisamei聯(lián)免疫試劑盒Human Akirin 1(AKIRIN1)ELISA Kit
人Ajuba蛋白(JUB)ELISA試劑盒JUBAjuba蛋白elisa檢測試劑盒Human Ajuba(JUB)ELISA Kit
人AHNAK核蛋白2(AHNAK2)ELISA試劑盒AHNAK2AHNAK核蛋白2elisa kitHuman AHNAK Nucleoprotein 2(AHNAK2)ELISA Kit
人AF4/FMR2家族成員1(AFF1)ELISA試劑盒AFF1AF4/FMR2家族成員1ELISA試劑盒Human AF4/FMR2 Family, Member 1(AFF1)ELISA Kit
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