產(chǎn)品名稱:臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基
規(guī)格:100mL/125mL×4
貨號:YS-02X10055
細(xì)胞生長實(shí)驗(yàn) :細(xì)胞生長良好,形態(tài)正常
儲存條件:2℃-8℃,避光儲存
運(yùn)輸條件:冰袋冷藏運(yùn)輸
公司產(chǎn)品僅用于科研
細(xì)胞培養(yǎng)步驟
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1) 準(zhǔn)備RPMI-1640 培養(yǎng)基;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%;Glutamax(invitrogen 35050061),1%;Sodium pyruvate(invitrogen 11360070),1%;雙抗,1%。
2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。
二. 細(xì)胞處理:
1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入250px皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
注意事項(xiàng):
(1)凍存前細(xì)胞狀態(tài),細(xì)胞最好在對數(shù)生長期,細(xì)胞密度適合,剛剛發(fā)生細(xì)胞融合,過密或連成片的細(xì)胞狀態(tài)不好,而且消化時(shí)不容易分散;
(2)凍存的密度不宜過低,10的6次方-7次方的數(shù)量級比較好,我凍存的細(xì)胞一般T25培養(yǎng)瓶(5*107),一瓶凍一管(1.5ml凍存管),10cm培養(yǎng)皿(大概10的8次方個(gè)細(xì)胞)分成兩管。
(3)消化和吹打,切忌胰酶消化過度,吹打不可太用力,最好不要吹出好多泡泡。消化后立即加入*培養(yǎng)基吹打哦,不是加入凍存液再吹打。
(4)離心后加入凍存液。凍存液中FBS的用量對于腫瘤細(xì)胞株而言要求不是很嚴(yán)格,我從10%-90%都用過,問題不大,個(gè)人認(rèn)為10%-20%可以了,能節(jié)約處就節(jié)約點(diǎn)嘛!另外,凍存液可以在處理細(xì)胞前配置,放在4度冰箱預(yù)冷。細(xì)胞離心后直接用預(yù)冷的凍存液重懸,移入凍存管。
(5)關(guān)于“慢凍",傳統(tǒng)的方法,LLC細(xì)胞凍存管用棉花包好,4度2h,-20度2h或更長,-80度過夜,最后液氮。對于條件較好的實(shí)驗(yàn)室和細(xì)胞凍存數(shù)量多的實(shí)驗(yàn)室,推薦使用程序降溫盒,內(nèi)裝異丙醇,在-80度并內(nèi)可以逐漸降溫,很方便,省了包棉花、4度、-20度了。
使用步驟:
一)準(zhǔn)確稱量試劑:根據(jù)不同的菌類和用途,選擇適宜的培養(yǎng)基,培養(yǎng)基所需試劑必須純凈。
(二)校正pH值:將稱量好的培養(yǎng)基各種成分放入容器內(nèi),標(biāo)記劃線,加熱溶解,補(bǔ)充水分,測定酸堿度,常用pH6.8~8.0的精密試紙或酸度計(jì)測定。用1N NaOH和1N HCl調(diào)節(jié)pH值到適宜范圍內(nèi)。
(三)過濾:將玻璃漏斗置鐵架上,再用人子宮成纖維細(xì)胞*培養(yǎng)基紗布夾棉花或用濾紙放在漏斗中,將上述培養(yǎng)基倒入其中過濾至透明。
(四)分裝:將過濾后的培養(yǎng)基分裝于中試管或三角瓶內(nèi)(試管內(nèi)每支裝5mL;三角瓶中裝100~150ml),塞好棉塞用牛皮紙包扎好,準(zhǔn)備滅菌。
(五)滅菌:培養(yǎng)基的滅菌,常用高壓蒸汽滅菌法。一般微生物的營養(yǎng)細(xì)胞在水中煮沸后即被殺死,但細(xì)菌的芽胞有較強(qiáng)的抗熱性,須經(jīng)高壓蒸汽滅菌才能達(dá)到*滅菌的目的。根據(jù)蒸汽溫度隨壓力升高而上升的原理,即壓力越大,蒸汽溫度就越高。因此,在同一溫度條件下,采用高壓蒸汽滅菌比干熱滅菌法效果要好。而且在濕熱情況下,菌體吸收水分后,其蛋白質(zhì)易于凝固變性,因?yàn)檎羝拇┩噶?qiáng),殺菌效果好。
細(xì)胞特性:
1)】組織來源于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的正常眼組織。
2)細(xì)胞鑒定:細(xì)胞免疫熒光染色為陽性。
3)經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。
4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。
5)細(xì)胞生長方式:上皮樣,不規(guī)則細(xì)胞,貼壁培養(yǎng)。
TIGAR humen/FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人TIGAR蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
B7-H1/PDL1/CD274(programmed death ligand 1) 程序性死亡配體1(多肽)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
生長抑素受體5抗體 SSTR5 0.2ml
S100P 英文名稱: S100鈣結(jié)合蛋白P抗體 0.1ml
ET-1 英文名稱: 內(nèi)皮素-1抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh Phospho-MAP2(Ser136) 磷酸化微管相關(guān)蛋白2抗體 規(guī)格 0.1ml
B7-H1/PDL1/CD274(programmed death ligand 1) 程序性死亡配體1(多肽)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
PMS2/FITC 熒光素標(biāo)記錯(cuò)配修復(fù)基因PMS2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Goat Guinea IgG Whole serum 羊抗豚鼠IgG抗血清Multi-class antibodies規(guī)格: 1ml
端粒酶抗體 hTRT Telomerase catalytic subunit 0.1ml
Rabbit Rat IgG whole serum 兔抗大鼠IgG抗血清 1ml
Spastin 英文名稱: 纖維母細(xì)胞表面蛋白抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh Phospho-Rb (Thr821) 磷酸化視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤相關(guān)蛋白1抗體 規(guī)格 0.1ml
Goat Guinea IgG Whole serum 羊抗豚鼠IgG抗血清Multi-class antibodies規(guī)格: 1ml
Goat Bovine IgG/PE-CY5 PE-CY5標(biāo)記的羊抗IgG 0.1ml
Fibrillin 2 英文名稱: 原纖維蛋白2抗體 0.2ml
CD86抗體 CD86/B7-2 0.1ml
OAT4L/URAT1 /FITC 熒光素標(biāo)記尿酸鹽重吸收轉(zhuǎn)運(yùn)子1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh PLAU/UPA/Urokinase 尿激酶型纖溶酶原激活因子抗體 規(guī)格 0.1ml
Rabbit chicken IgG/HRP 辣根過氧化物酶標(biāo)記兔抗雞IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基活體細(xì)胞半胱蛋白酶13(CASPASE-13)活性原位熒光染色檢測試劑盒20次人硫酸腦苷酯(SFT)ELISA試劑盒,
凍切片半胱蛋白酶13(CASPASE-13)活性原位熒光染色檢測試劑盒50次人未甲基化寡聚脫氧核苷酸(CpG-ODN)ELISA試劑盒,
活體細(xì)胞半胱蛋白酶(CASPASE)總活性原位熒光染色檢測試劑盒20次小鼠雌三醇(E3)ELISA試劑盒,
凍切片半胱蛋白酶(CASPASE)總活性原位熒光染色檢測試劑盒50次大鼠二氧化酶(DAO)ELISA試劑盒,
組織蛋白酶(CATHEPSIN)活性原位熒光染色試劑專題大鼠胱天蛋白酶3(Casp-3)ELISA試劑盒,
名稱規(guī)格大鼠Ⅰ型前膠原羧基端肽(PⅠCP)ELISA試劑盒,
活體細(xì)胞組織蛋白酶L(CATHEPSIN L)活性原位熒光染色檢測試劑盒20次植物K1(VK1)ELISA試劑盒,
凍切片組織蛋白酶L(CATHEPSIN L)活性原位熒光染色檢測試劑盒20次多效生長因子(PTN)ELISA試劑盒--動(dòng)物,人
活體細(xì)胞組織蛋白酶K(CATHEPSIN K)活性原位熒光染色檢測試劑盒20次集落因子(CSF)ELISA試劑盒--動(dòng)物,人
凍切片組織蛋白酶K(CATHEPSIN K)活性原位熒光染色檢測試劑盒20次真 菌培養(yǎng)基 用于藥品,生物制品霉菌無菌試驗(yàn)(GB標(biāo)準(zhǔn))
活體細(xì)胞組織蛋白酶B(CATHEPSIN B)活性原位熒光染色檢測試劑盒20次AC肉湯用于常見微生物增菌培養(yǎng)和不含防腐劑樣品的無菌試驗(yàn)(Alpha Biosciences方法)
凍切片組織蛋白酶B(CATHEPSIN B)活性原位熒光染色檢測試劑盒20次D-環(huán)絲
化學(xué)固著液試劑專題甘油酶
名稱規(guī)格花寶3號
通用化學(xué)固著溶液10毫升萘酚綠B