牙齦卟啉單胞菌探針法熒光定量PCR試劑盒

牙齦卟啉單胞菌探針法熒光定量PCR試劑盒是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程，后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計的引物來指示擴增的增加。

【產(chǎn)品名稱】牙齦卟啉單胞菌探針法熒光定量PCR試劑盒
【英文名稱】Porphyromonas gingivalis
【產(chǎn)品編號】YSP7100
【包裝規(guī)格】50T
【預(yù)期用途】
產(chǎn)品僅用于科研本產(chǎn)品可用于肉及肉制品中鴨源性成分的定性檢測，所用儀器為實時熒光PCR儀，可通過實時擴增曲線判斷樣品中是否存在鴨源性成分。
【檢驗原理】
本試劑盒采用實時熒光PCR技術(shù)，針對鴨源性成分核酸序列設(shè)計特異性引物和熒光探針，通過實時熒光一步法RT-PCR（Taqman探針法）對鴨源性成分核酸進(jìn)行定性檢測。
*的擴增性能:
高性能的UNICONTM Taq DNA聚合酶及優(yōu)化的反應(yīng)體系保證更高的擴增效率。以相同量的293T細(xì)胞cDNA為模板，擴增β-actin基因，與同類產(chǎn)品相比，UNICONTM qPCR Master Mix擴增信號更強，擴增效率更高。
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PCR實驗方法步驟：
牙齦卟啉單胞菌探針法熒光定量PCR試劑盒方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。
3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

循環(huán)步驟	溫度	時間	循環(huán)數(shù)
預(yù)變性	94℃	5   min	1
變性	94℃	10   sec	30-40
退火	50-65℃	20   sec	30-40
延伸	72℃	30   sec/kb	30-40
終延伸	72℃	5   min	1

實驗步驟：
典型的PCR由
（1）高溫變性模板；
（2）引物與模板退火；
（3）引物沿模板延伸三步反應(yīng)組成一個循環(huán)，通過多次循環(huán)反應(yīng)，使目的DNA得以迅速擴增。其要步驟是：
將待擴增的模板DNA置高溫下（通常為93℃-94℃）使其變性解成單鏈；
人工合成的兩個寡核苷酸引物在其合適的復(fù)性溫度下分別與目的基因兩側(cè)的兩條單鏈互補結(jié)合，兩個引物在模板上結(jié)合的位置決定了擴增片段的長短；
耐熱的DNA聚合酶（Taq酶）在72℃將單核苷酸從引物的3’端開始摻入，以目的基因為模板從5’→3’方向延伸，合成DNA的新互補鏈。
epimedin B胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白7檢測試劑盒0.5mL

正辛(分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.9%(GC)) 質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.9%(GC) n-Octanoic acid 禽膽鹽/Bile salt from poultryBR25克國產(chǎn)/進(jìn)口

P選擇素(SELP)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)重組人 CRIPT / cysteine-rich PDZ-binding 蛋白 (His 標(biāo)簽)*1000mL/瓶

AlphaNAG (Human AlphaNacetylglucosaminidase) ELISA Kit  人αN已酰氨基葡糖苷酶CAS號：2594628GDPL半乳糖酶檢測試盒100mlHuman/人Elisa試盒3132998

epimedin A胰島素樣因子3檢測試劑盒20mg

銀杏內(nèi)酯J  英文名稱：Ginkgolide J   保存：-20℃   規(guī)格：HPLC≥98% 20mg/支 腫瘤壞死因子受體1相關(guān)死亡域蛋白抗體

α-乳清蛋白(αLA)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)重組人 LC3B / MAP1LC3B 蛋白 (His 標(biāo)簽)*1000mL/瓶

人CXCL9/MIGIGF2BP2/IMP2  胰島素樣生長子ⅡmRNA結(jié)合蛋白2抗體Azoaminoglutethimide規(guī)格:300mgUL16結(jié)合蛋白1檢測試盒20mg人神經(jīng)內(nèi)分泌分化的結(jié)腸癌細(xì)胞上皮細(xì)胞，LCC18細(xì)胞1x10^6cells

EDANS5mg

赤芍(川赤芍)  英文名稱：Radix Paeoniae Rubra (RPR)   保存：-20℃   規(guī)格：0.5g 嗅覺受體家族5亞基1抗體  

Cetrimide Agar Medium綠膿桿菌的分離蛋白激酶G檢測試盒20mg雷帕霉素靶蛋白檢測試盒GranulocyteColonyStimulatingFactor

EDANS5mg

雙環(huán)醇（標(biāo)準(zhǔn)品） 質(zhì)量規(guī)格：含量測定 Bicyclol 灰色鏈霉菌 Streptomyces griseus佛羅里達(dá)側(cè)耳 Pleurotus florida

Tellurite Broth Base金黃色葡萄球菌的增菌培養(yǎng)，每100ml培養(yǎng)基需另加入1%亞碲鈉1mlⅡ型膠原螺旋肽檢測試盒20mg粒細(xì)胞集落刺激子檢測試盒Crestinephosphokinase

2氨基吖  5mg

異 訂購|咨詢 規(guī)格： HPLC≥99%;0.5mL 半乳糖凝集素3抗體 HMWK ELISA Kit 高分子量激肽原(HMWK)ELISA試劑盒

ToxinProducing Medium青霉、曲霉的產(chǎn)培養(yǎng)五型腺病抗體檢測試盒20mg肌激酶檢測試盒keratansulfate
牙齦卟啉單胞菌探針法熒光定量PCR試劑盒西紅花苷I CAS號： 94238003 規(guī)格： HPLC≥97%;20mg 訂購|咨詢

西紅花苷 CAS號： 42553651 規(guī)格： Standard（標(biāo)準(zhǔn)）;20mg 訂購|咨詢

煙酰 CAS號： 98920 規(guī)格： HPLC≥99.5%;50mg 訂購|咨詢

五味子 CAS號： 58546546 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

五味子 CAS號： 58546568 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

五味子 CAS號： 58546557 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

五味子 CAS號： 7432282 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

五味子素 CAS號： 61281376 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

五味子素 CAS號： 61281387 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

鳶尾苷 CAS號： 611405 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

鳶尾黃素 CAS號： 548776 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

胡椒堿 CAS號： 94622 規(guī)格： HPLC≥99%;20mg 訂購|咨詢

二辣椒堿 CAS號： 19408845 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

辣椒堿 CAS號： 404864 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

β谷甾 CAS號： 83465 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟：
(1)將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線；
(2)待測樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。
產(chǎn)品僅用于科研其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
其中所述參照基因為本領(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。步驟(2)為：待測樣本與步(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。
其中所述待測目的基因為本領(lǐng)域常規(guī)待測目的基因，較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。