皺褶青霉探針法熒光定量PCR試劑盒

皺褶青霉探針法熒光定量PCR試劑盒是指在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程，后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設計的引物來指示擴增的增加。

【產(chǎn)品名稱】皺褶青霉探針法熒光定量PCR試劑盒
【英文名稱】Penicillium rugulosum
【產(chǎn)品編號】YSP7066
【包裝規(guī)格】50T
【預期用途】
產(chǎn)品僅用于科研本產(chǎn)品可用于肉及肉制品中鴨源性成分的定性檢測，所用儀器為實時熒光PCR儀，可通過實時擴增曲線判斷樣品中是否存在鴨源性成分。
【檢驗原理】
本試劑盒采用實時熒光PCR技術，針對鴨源性成分核酸序列設計特異性引物和熒光探針，通過實時熒光一步法RT-PCR（Taqman探針法）對鴨源性成分核酸進行定性檢測。
*的擴增性能:
高性能的UNICONTM Taq DNA聚合酶及優(yōu)化的反應體系保證更高的擴增效率。以相同量的293T細胞cDNA為模板，擴增β-actin基因，與同類產(chǎn)品相比，UNICONTM qPCR Master Mix擴增信號更強，擴增效率更高。
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PCR實驗方法步驟：
皺褶青霉探針法熒光定量PCR試劑盒方法
1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。
3：結束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
PCR反應鑒定——PCR反應條件:

循環(huán)步驟	溫度	時間	循環(huán)數(shù)
預變性	94℃	5   min	1
變性	94℃	10   sec	30-40
退火	50-65℃	20   sec	30-40
延伸	72℃	30   sec/kb	30-40
終延伸	72℃	5   min	1

實驗步驟：
典型的PCR由
（1）高溫變性模板；
（2）引物與模板退火；
（3）引物沿模板延伸三步反應組成一個循環(huán)，通過多次循環(huán)反應，使目的DNA得以迅速擴增。其要步驟是：
將待擴增的模板DNA置高溫下（通常為93℃-94℃）使其變性解成單鏈；
人工合成的兩個寡核苷酸引物在其合適的復性溫度下分別與目的基因兩側的兩條單鏈互補結合，兩個引物在模板上結合的位置決定了擴增片段的長短；
耐熱的DNA聚合酶（Taq酶）在72℃將單核苷酸從引物的3’端開始摻入，以目的基因為模板從5’→3’方向延伸，合成DNA的新互補鏈。
98%25g1g赤式2(4基2,6二基基)1(4羥基3基基)1醇57160471zonula occluden1

3-(N-乙酰-L-半胱氨-S-基)對乙酰氨基酚鈉鹽 質量規(guī)格：國進口 3-(N-Acetyl-L-cystein-S-yl) Acetaminophen Sodium Salt 人直腸粘膜上細胞*培養(yǎng)基100mL

 Madecassoside蒿相關物質B標準品規(guī)格：規(guī)格：人精氨脫羧酶(ADC)ELISA試劑盒 0.2ml

MN(Human Mannose) ELISA Kit  人甘露糖CAS號：1026353207 還原型抗壞血檢測試盒500mgHuman/人Elisa試盒3107344

98%25g5g醉椒素72962437Occludin

羅硝唑 質量規(guī)格：>98.5%,BR Ronidazole 化高鐵血紅蛋白參比液(4種×2套) /Cyanomethemoglobin reference solution10毫升×8支國產(chǎn)/進口

Asiatic acid青蒿琥酯標準品規(guī)格：規(guī)格：人軸抑制蛋白2(Axin-2)ELISA試劑盒 0.2ml

MR(Human mannose receptor) ELISA Kit  人甘露糖受體CAS號：102625649 谷胱甘肽過氧化物酶檢測試盒100mgHuman/人Elisa試盒3635

3基7羥基香豆素5mg

辛硫標準溶液(100μg/ml,u=4%) 質量規(guī)格：100μg/ml,u=4%  Phoxim solution

AQP2 (aquaporin Protein2)  水通道蛋白2（抗原）*抗精子抗體檢測試盒25gHuman/人Elisa試盒496468

熒光素二鈉鹽5mg

 補體成分2(C2)重組蛋白英文名稱：Recombinant Complement Component 2 (C2)

ABCA1(ATP binding cassette transporter A1)  腺苷三結合盒轉運體A1抗原進口、分裝BMP結合內(nèi)皮調節(jié)子檢測試盒500gHuman/人Elisa試盒4964710

98%100g100ml胃蛋白酶（豬胃粘膜）Epigen

辛硫標準溶液(10μg/ml,u=6%) 質量規(guī)格：10μg/ml,u=6% Phoxim solution

ABCG1 peptide  三腺苷結合盒亞家族G1抗原進口、原裝尿白蛋白檢測試盒5gHuman/人Elisa試盒4964710
皺褶青霉探針法熒光定量PCR試劑盒遠志皂苷B CAS號：  規(guī)格： HPLC≥98%;5mg 訂購|咨詢

藤黃 CAS號： 2752650 規(guī)格： HPLC≥95%;20mg 訂購|咨詢

構樹堿A CAS號： 173220070 規(guī)格： HPLC≥98%;5mg 訂購|咨詢

11羥柳杉 CAS號： 88664088 規(guī)格： HPLC≥98%;5mg 訂購|咨詢

3β酰氧7,25甘遂二24 CAS號： 1352001092 規(guī)格： HPLC≥98%;5mg 訂購|咨詢

林澤蘭內(nèi)C CAS號：  規(guī)格： HPLC≥98%;5mg 訂購|咨詢

林澤蘭內(nèi)B CAS號：  規(guī)格： HPLC≥98%;10mg 訂購|咨詢

蒲公英甾 CAS號： 6426433 規(guī)格： HPLC≥98%;10mg 訂購|咨詢

15羥松香 CAS號：  規(guī)格： HPLC≥98%;5mg 訂購|咨詢

金合歡素;刺槐素 CAS號： 480444 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

大黃8O葡萄糖苷 CAS號： 13241286 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

正酞;酞內(nèi) CAS號： 6066495 規(guī)格： HPLC≥98%;50mg 訂購|咨詢

澳洲茄;澳州茄 CAS號： 126170 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

扁蓄苷 CAS號： 572305 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

7表紫杉 CAS號： 105454044 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟：
(1)將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線；
(2)待測樣本與步驟(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結果。
產(chǎn)品僅用于科研其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線。
其中所述參照基因為本領域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴增區(qū)域，其中所述質粒載體為本領域常規(guī)質粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標準品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標準品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標準曲線法應用中目的基因與參照基因的濃度比例關系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。步驟(2)為：待測樣本與步(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結果。
其中所述待測目的基因為本領域常規(guī)待測目的基因，較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴增為本領域常規(guī)熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。