雙?？虏《咎结樂晒舛縋CR試劑盒

雙?？虏《咎结樂晒舛縋CR試劑盒所謂實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測整個(gè)PCR進(jìn)程，后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。

參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：雙埃柯病毒探針法熒光定量PCR試劑盒
英文名稱：Parechovirus(PeV)
產(chǎn)品規(guī)格：50T
產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
產(chǎn)品特點(diǎn)：本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
運(yùn)輸及保存
低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限一年。
自備試劑
DNA模板、10×ROX（根據(jù)機(jī)型決定，具體見使用方法）。
產(chǎn)品及特點(diǎn)：
1. 即開即用，用戶只需要提供病毒樣品。
2. 根據(jù)鮑皰疹樣病毒探針法熒光定量保守序列設(shè)計(jì)的專一性引物，與相關(guān)病毒無交叉反應(yīng)。
3. 靈敏度可以達(dá)到幾百拷貝/反應(yīng)。
4. 一管式熒光定量PCR檢測，避免后續(xù)污染。
5. 本試劑盒足夠50次20μL反應(yīng)體系的熒光定量PCR。
本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

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實(shí)驗(yàn)過程：
一、雙?？虏《咎结樂晒舛縋CR試劑盒試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．產(chǎn)品僅用于科研對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
      10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1（10pM）               2μl
      引物2（10PM）              2μl
      Taq酶（2U/μl）            1μl
      DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
     加ddH2O至               50 μl
     視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
使用方法：
一、稀釋PCR陽性對照（以10E2-10E7拷貝/μL這6個(gè)10倍稀釋度為例）
1. 注意：由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的DN段作為陽性對照。
2. 標(biāo)記6個(gè)離心管，分別為7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。
4. 在7號(hào)管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩1分鐘，得1×10E7拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭，在6號(hào)管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
6. 換槍頭，在5號(hào)管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對照到5號(hào)管中，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
二、樣品DNA的制備
8. 如果有N個(gè)樣品，必須設(shè)置N+2個(gè)提取，多出的一個(gè)是PC（樣品制備陽性對照），一個(gè)是NC（樣品制備陰性對照）?？梢杂?0μL上步制備的PCR陽性對照的第4號(hào)（濃度為1×10E4 拷貝/μL，10μL相當(dāng)于1萬拷貝）或第5號(hào)（濃度為1×10E5 拷貝/μL，10μL相當(dāng)于10萬拷貝）再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品，則PC和NC的體積也必須是200μL。
9. 用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒DNA提取試劑盒兼容。
三、設(shè)置qPCR反應(yīng)（20 μL體系，在樣品制備室進(jìn)行）
10. 如果只做1次重復(fù)，則標(biāo)記N+9個(gè)PCR管，其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品，1個(gè)用于PCR陰性對照，6個(gè)用于PCR陽性對照。如果做2-3次重復(fù)，則反應(yīng)設(shè)置數(shù)量相應(yīng)增加2或3倍。
11. 在標(biāo)記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽性對照，并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲(chǔ)存好。
以下是公司正在熱銷的產(chǎn)品：
≥97%25g25g阿嗎定84162Keratin, type II cytoskeletal 1b

鹽咪達(dá)普利（標(biāo)準(zhǔn)品） 質(zhì)量規(guī)格：HPLC法含量測定 Imidapril Hydrochloride 熱帶假絲酵母 Candida tropicalisSwiss albion小鼠胚胎成纖維細(xì)胞

血栓調(diào)節(jié)蛋白(TM)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)重組人 GALNT2 / GalNAc-T2 蛋白 (His 標(biāo)簽)*250(g)

human similar to cDNA sequence BC027382 ELISA Kit  人類似cDNA順序BC027382CAS號(hào)：844烯氧化酶檢測試盒150kuHuman/人Elisa試盒309886

≥97%100g1g利血那明69004042glial cell linederived neurotrophic factor

alpha-亞麻(標(biāo)準(zhǔn)品) 質(zhì)量規(guī)格：≥98.5%(GC),分析標(biāo)準(zhǔn)品 Linolenic acid 異常漢遜酵母 Hansenula anomala球菌脂亞種 Lactococcus lactis subsp. cremoris

血栓調(diào)節(jié)蛋白(TM)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)重組人 COL5A2 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)*250(g)

human similar to RIKEN cDNA 4931408D14 gene ELISA kit  人類似RIKEN cDNA 4931408D14 基CAS號(hào)：81756酯酶D檢測試盒100gHuman/人Elisa試盒30992291

97%25mg100g木瓜蛋白酶laminin β3

異隆;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書 訂購|咨詢 規(guī)格： 0.1g 肌動(dòng)蛋白解聚因子19抗體 ENPP3 ELISA Kit 外核苷焦酶/二酯酶3(ENPP3)ELISA試劑盒

2,4D/KLH(2,4Dichlorophenoxyacetic acid)  2，4二氧偶聯(lián)血藍(lán)蛋白現(xiàn)貨供應(yīng)脫腳病病檢測試盒1gHuman/人Elisa試盒4949137

97%100mg5g木瓜蛋白酶laminin β2

多潘立  英文名稱：Domperidone   保存：-20℃   規(guī)格：100mg 化G蛋白信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)調(diào)節(jié)因子19抗體

2,4D/BSA  2，4二氧偶聯(lián)牛血清白蛋白*單核細(xì)胞趨化蛋白2檢測試盒1gHuman/人Elisa試盒4949444

97%5g25g菠蘿蛋白酶laminin β1

三七皂苷FC 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢 人紅細(xì)胞生成素受體(EPOR)ELISA試劑盒人96T78-5000 pg/mL小鼠突觸極蛋白2(SYNPO2)ELISA試劑盒，英文名：SYNPO2 ELISA Kit

Akt/PKB  蛋白激酶B（抗原）進(jìn)口、分裝白三烯E4檢測試盒1gHuman/人Elisa試盒4949444
雙埃柯病毒探針法熒光定量PCR試劑盒大豆皂苷Ba CAS號(hào)： 114590204 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

賽門苷I CAS號(hào)： 126105122 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

甜茶苷 CAS號(hào)： 64849394 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

土荊皮 CAS號(hào)： 82601410 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

土槿皮OβD葡萄糖苷 CAS號(hào)： 98891419 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

土槿皮OβD葡萄糖苷 CAS號(hào)： 98891442 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

土荊皮 CAS號(hào)： 82508325 規(guī)格： HPLC≥98%;10mg 訂購|咨詢

原花青素B1 CAS號(hào)： 20315257 規(guī)格： HPLC≥95%;5mg 訂購|咨詢

里奧林 CAS號(hào)： 466262 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

羅漢果苷VI CAS號(hào)： 89590987 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

羅漢果苷IV CAS號(hào)： 89590954 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

羅漢果苷III CAS號(hào)： 130567838 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

山楂 CAS號(hào)： 4373415 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

棕矢車菊素 CAS號(hào)： 18085977 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

異芒果苷 CAS號(hào)： 24699169 規(guī)格： HPLC≥98%;10mg 訂購|咨詢