派琴蟲通用探針法熒光定量PCR試劑盒

派琴蟲通用探針法熒光定量PCR試劑盒是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來指示擴(kuò)增的增加。

【產(chǎn)品名稱】派琴蟲通用探針法熒光定量PCR試劑盒
【英文名稱】Perkinsus
【產(chǎn)品編號(hào)】YSP7074
【包裝規(guī)格】50T
【預(yù)期用途】
產(chǎn)品僅用于科研本產(chǎn)品可用于肉及肉制品中鴨源性成分的定性檢測(cè)，所用儀器為實(shí)時(shí)熒光PCR儀，可通過實(shí)時(shí)擴(kuò)增曲線判斷樣品中是否存在鴨源性成分。
【檢驗(yàn)原理】
本試劑盒采用實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)，針對(duì)鴨源性成分核酸序列設(shè)計(jì)特異性引物和熒光探針，通過實(shí)時(shí)熒光一步法RT-PCR（Taqman探針法）對(duì)鴨源性成分核酸進(jìn)行定性檢測(cè)。
*的擴(kuò)增性能:
高性能的UNICONTM Taq DNA聚合酶及優(yōu)化的反應(yīng)體系保證更高的擴(kuò)增效率。以相同量的293T細(xì)胞cDNA為模板，擴(kuò)增β-actin基因，與同類產(chǎn)品相比，UNICONTM qPCR Master Mix擴(kuò)增信號(hào)更強(qiáng)，擴(kuò)增效率更高。
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PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：
派琴蟲通用探針法熒光定量PCR試劑盒方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。
3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

循環(huán)步驟	溫度	時(shí)間	循環(huán)數(shù)
預(yù)變性	94℃	5   min	1
變性	94℃	10   sec	30-40
退火	50-65℃	20   sec	30-40
延伸	72℃	30   sec/kb	30-40
終延伸	72℃	5   min	1

實(shí)驗(yàn)步驟：
典型的PCR由
（1）高溫變性模板；
（2）引物與模板退火；
（3）引物沿模板延伸三步反應(yīng)組成一個(gè)循環(huán)，通過多次循環(huán)反應(yīng)，使目的DNA得以迅速擴(kuò)增。其要步驟是：
將待擴(kuò)增的模板DNA置高溫下（通常為93℃-94℃）使其變性解成單鏈；
人工合成的兩個(gè)寡核苷酸引物在其合適的復(fù)性溫度下分別與目的基因兩側(cè)的兩條單鏈互補(bǔ)結(jié)合，兩個(gè)引物在模板上結(jié)合的位置決定了擴(kuò)增片段的長短；
耐熱的DNA聚合酶（Taq酶）在72℃將單核苷酸從引物的3’端開始摻入，以目的基因?yàn)槟０鍙?’→3’方向延伸，合成DNA的新互補(bǔ)鏈。
99%1g5ml新環(huán)桑色141112290growth differentiation factor 15

厚樸酚 質(zhì)量規(guī)格：≥98%,BR Magnolol

Tectorigenin維生素C棕櫚酯標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格：規(guī)格：人ALK酪氨激酶受體ELISA試劑盒 0.2ml

C/EBP Epsilon (Human CCAAT/enhancer binding protein epsilon) ELISA Kit  人CCAAT增強(qiáng)子結(jié)合蛋白εCAS號(hào)：10161338 中性轉(zhuǎn)化酶檢測(cè)試盒500mgHuman/人Elisa試盒3115682

99%500g25ml4'羥基5,6脫醉椒素99105778Sulfhydryl oxidase 1

 小鼠肝細(xì)胞英文名稱：Hepa 1-6

Tectoridin醉茄粉末提取物標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格：規(guī)格：人小扁豆素結(jié)合型胎蛋白/胎蛋白異質(zhì)體3(AFP-L3)ELISA試劑盒 0.2ml

C/EBP Delta(Human CCAAT/enhancer binding protein deta) ELISA Kit  人CCAAT增強(qiáng)子結(jié)合蛋白δCAS號(hào)：101268 二醛酶1檢測(cè)試盒100mgHuman/人Elisa試盒3115682

1M in THF50g5g胃蛋白酶（豬胃粘膜）Recombinant Multimerin 1

 UACC-812(人腺導(dǎo)管瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2

Bromcersol Purple Broth Base微生物檢驗(yàn)中各種糖發(fā)酵實(shí)驗(yàn)，無菌加入各種糖醇類物質(zhì)抗雌激素受體β抗體檢測(cè)試盒20mg活性氧簇檢測(cè)試盒TroponinⅠ

99%10g25g胃蛋白酶（豬胃粘膜）αSynuclein

毒莠定(分析標(biāo)準(zhǔn)品,98.5%) 質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品,98.5%  Picloram

Thioglycollate Medium用于培養(yǎng)需氧菌、微需氧菌和厭氧菌銅鋅超氧化物歧化酶檢測(cè)試盒20mg肌鈣蛋白I檢測(cè)試盒Creatinine

99%5g100g胃蛋白酶（豬胃粘膜）interleukin2 receptor alpha

 NCI-H1975(人肺腺細(xì)胞)5×106cells/瓶×2

ASS Agar用于磺胺類靈敏度試驗(yàn)（WHO方法）富組氨糖蛋白檢測(cè)試盒20mg肌酐檢測(cè)試盒CreatineKinase
派琴蟲通用探針法熒光定量PCR試劑盒茯苓 CAS號(hào)： 29070926 規(guī)格： HPLC≥98%;5mg 訂購|咨詢

氧芍藥苷 CAS號(hào)： 39011911 規(guī)格： BR，99%，有;20mg 訂購|咨詢

新穿心蓮內(nèi) CAS號(hào)： 27215141 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

蓮心堿 CAS號(hào)： 2292162 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

酞 CAS號(hào)： 551086 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

桑皮苷C CAS號(hào)： 102841430 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

桑皮苷A CAS號(hào)： 102841429 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

桑辛素 CAS號(hào)： 62596296 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

丹參B CAS號(hào)：  規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

原薯蕷皂苷 CAS號(hào)： 54522520 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

橙皮苷 CAS號(hào)： 11013971 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

木蘭花堿 CAS號(hào)： 6681181 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

芳樟 CAS號(hào)： 78706 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

蓮心堿 CAS號(hào)： 2586961 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

蓮心堿高氯鹽 CAS號(hào)： 5088904 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
熒光定量PCR檢測(cè)方法包括以下步驟：
(1)將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線；
(2)待測(cè)樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。
產(chǎn)品僅用于科研其中步驟(1)為：將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
其中所述參照基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴(kuò)增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測(cè)目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題，提高HER2基因擴(kuò)增檢測(cè)的可靠性。步驟(2)為：待測(cè)樣本與步(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。
其中所述待測(cè)目的基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)待測(cè)目的基因，較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴(kuò)增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴(kuò)增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴(kuò)增方法，所述熒光定量PCR擴(kuò)增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴(kuò)增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴(kuò)增。