鼠痘病毒探針法熒光定量PCR試劑盒

實驗過程：
一、鼠痘病毒探針法熒光定量PCR試劑盒試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．產(chǎn)品僅用于科研對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
      10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1（10pM）               2μl
      引物2（10PM）              2μl
      Taq酶（2U/μl）            1μl
      DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
     加ddH2O至               50 μl
     視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：鼠痘病毒探針法熒光定量PCR試劑盒
英文名稱：Mouse Pox Virus(MPV)
產(chǎn)品規(guī)格：50T
產(chǎn)品運輸：低溫運輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
產(chǎn)品特點：本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
運輸及保存
低溫運輸，-20℃保存，保存期限一年。
自備試劑
DNA模板、10×ROX（根據(jù)機(jī)型決定，具體見使用方法）。
本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

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產(chǎn)品及特點：
1. 即開即用，用戶只需要提供病毒樣品。
2. 根據(jù)鮑皰疹樣病毒探針法熒光定量保守序列設(shè)計的專一性引物，與相關(guān)病毒無交叉反應(yīng)。
3. 靈敏度可以達(dá)到幾百拷貝/反應(yīng)。
4. 一管式熒光定量PCR檢測，避免后續(xù)污染。
5. 本試劑盒足夠50次20μL反應(yīng)體系的熒光定量PCR。
以下是公司正在熱銷的產(chǎn)品：
Tanshinone I腫瘤壞死因子受體超家族成員18檢測試劑盒2mg

 SF17(人腦瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2

Cryptotanshinone腺嘌呤標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格：規(guī)格：人血清淀粉樣P物質(zhì)(SAP)Polyclonal Antibody 0.2ml

人血栓調(diào)節(jié)蛋白(TM) ELISA試盒UBE2M  泛素蛋白連接酶M抗體規(guī)格:96T/48TAdenosine規(guī)格:350mgapelin 36檢測試盒20mg人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞，NCIH460細(xì)胞1x10^6cells

98%25g1g高黃綠111966Carotene

3-異倒捻子素 質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 3-isomangostin

Sodium DanshensuS-腺苷-L-高半胱氨標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格：規(guī)格：人血小板解整合素樣金屬蛋白酶20(ADAMTS20)Polyclonal Antibody 0.2ml

人血小板衍化生長子(PDGF)UBE2Q1  泛素蛋白連接酶Q1抗體規(guī)格:96T/48TAgigenin規(guī)格:25mgArgonaut2蛋白檢測試盒20mg人膽管癌細(xì)胞，HuH28細(xì)胞1x10^6cells

5羥基色氨2× SYBR Green qPCR 試劑盒5mg

羅紅霉素 規(guī)格： HPLC≥98%;200mg 訂購|咨詢 人無孢蛋白(ASPN)ELISA試劑盒人96T0.156-10 ng/mL小鼠神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白2(NRG2)ELISA試劑盒，英文名：NRG2 ELISA Kit

Horse IgG  (親和純化) 馬IgG*N酰輔酶A檢測試盒100gHuman/人Elisa試盒4774145

花青素RibaGreen（效果同RiboGreen）RNA 定量檢測試劑 *2000次*5mg

迷迭香;Rosmarinic acid 訂購|咨詢 規(guī)格： 20mg 絲/蘇氨蛋白質(zhì)激酶抗體 MCH ELISA Kit 黑色素濃縮激素(MCH)ELISA試劑盒

Horse IgM  (親和純化) 馬IgM進(jìn)口、分裝琥珀酰輔酶A檢測試盒10gHuman/人Elisa試盒477535436

花青素RibaGreen（效果同RiboGreen）RNA 定量檢測試劑 *2000次*5mg

烏拉地爾雜質(zhì)A 訂購|咨詢 規(guī)格： 20mg 人醇羧激酶(PEPCK-C)ELISA試劑盒人96T0.312-20 ng/mL大鼠α2巨球蛋白(α2-MG)ELISA試劑盒，英文名：α2-MG ELISA Kit

human IgG  (親和純化) 人IgG進(jìn)口、原裝組蛋白檢測試盒25gHuman/人Elisa試盒477600752
鼠痘病毒探針法熒光定量PCR試劑盒L亮氨 ;LLeucine CAS號： 61905 規(guī)格： 100mg 訂購|咨詢

氨葡萄糖;Glucosamine CAS號： 14999430 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢

辣椒堿;Capsaicin CAS號： 404864 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢

蓮心堿高氯鹽;Liensinine p CAS號： 5088904 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢

羅通定;Rotundine CAS號： 10097844， 2934976 規(guī)格： 50mg 訂購|咨詢

洛伐他汀;Lovastatin CAS號： 75330755 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢

氯兩面針堿;Nitidine Chlo CAS號： 13063042 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢

遼東楤木皂苷Ⅶ;Araloside VI CAS號： 340982221 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢

遼東楤木皂苷Ⅴ;Araloside V CAS號： 340963862 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢

遼東楤木皂苷Ⅹ;Araloside X CAS號： 344911906 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢

辛;Lipoic acid CAS號： 62464 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢

羅丹明B;Rhodamine B CAS號： 81889 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢

六羧;DLPipecolini CAS號： 535751 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢

絡(luò)塞維;Rosavin CAS號： 84954927 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢

諾米林;nomilin CAS號： 1063770 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢
使用方法：
一、稀釋PCR陽性對照（以10E2-10E7拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例）
1. 注意：由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的DN段作為陽性對照。
2. 標(biāo)記6個離心管，分別為7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。
4. 在7號管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩1分鐘，得1×10E7拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭，在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
6. 換槍頭，在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對照到5號管中，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
二、樣品DNA的制備
8. 如果有N個樣品，必須設(shè)置N+2個提取，多出的一個是PC（樣品制備陽性對照），一個是NC（樣品制備陰性對照）?？梢杂?0μL上步制備的PCR陽性對照的第4號（濃度為1×10E4 拷貝/μL，10μL相當(dāng)于1萬拷貝）或第5號（濃度為1×10E5 拷貝/μL，10μL相當(dāng)于10萬拷貝）再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品，則PC和NC的體積也必須是200μL。
9. 用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒DNA提取試劑盒兼容。
三、設(shè)置qPCR反應(yīng)（20 μL體系，在樣品制備室進(jìn)行）
10. 如果只做1次重復(fù)，則標(biāo)記N+9個PCR管，其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品，1個用于PCR陰性對照，6個用于PCR陽性對照。如果做2-3次重復(fù)，則反應(yīng)設(shè)置數(shù)量相應(yīng)增加2或3倍。
11. 在標(biāo)記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽性對照，并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好。