支原體熒光定量PCR檢測(cè)試劑盒(qPCR經(jīng)典法)

Venor®Gem qEP

1. 內(nèi)控對(duì)照為獨(dú)立包裝，遵循歐洲藥典和日本藥典操作流程。

2. 高特異性，一次檢測(cè)即可涵蓋所有常見易感染細(xì)胞的支原體物種（包括歐洲藥典規(guī)定的9種支原體）。與細(xì)菌和真核DNA無(wú)交叉反應(yīng)。

3. 高靈敏度，檢測(cè)限可達(dá)到≤10CFU/ml。

4. 有相應(yīng)配套的支原體基因組DNA和細(xì)菌基因組DNA，便于特異性驗(yàn)證。

5.有相應(yīng)配套的支原體定量標(biāo)準(zhǔn)品，便于后定量檢測(cè)。

操作步驟

第1步：樣本處理

a.細(xì)胞培養(yǎng)上清

b. 生物藥或需遵循藥典的樣本

說(shuō)明：①樣品基質(zhì)可能會(huì)影響檢測(cè)的靈敏度。收集和篩選更高的樣品量可提高測(cè)定靈敏度。

   ②細(xì)胞培養(yǎng)物樣本含豐富的DNA酶，在低溫下也能降解支原DNA，影響檢測(cè)靈敏度。建議：樣本做DNA 抽提處理，實(shí)現(xiàn)高靈敏度。

             推薦：德國(guó)MB公司生產(chǎn)的支原體DNA提取試劑盒

             Venor® Gem Sample Preparation Kit

              該DNA抽提試劑盒已經(jīng)過(guò)廣泛驗(yàn)證。

第2步：試劑制備

a. 凍干粉溶解

b. 反應(yīng)體系制備

b1) 樣品為細(xì)胞上清篩查——反應(yīng)體系制備

b2) 樣品為生物藥——反應(yīng)體系制備

第3步：?jiǎn)?dòng)熒光定量PCR儀

第4步：結(jié)果判別

FAM通道：檢測(cè)支原體熒光信號(hào)。HEX通道：檢測(cè)內(nèi)控對(duì)照熒光信號(hào)。

支原體DNA和內(nèi)控DNA存在信號(hào)的競(jìng)爭(zhēng)性抑制。

支原體DNA越多，F(xiàn)AM通道信號(hào)越高，檢測(cè)內(nèi)控對(duì)照的HEX通道信號(hào)越低。

定量需基于Ct值和DNA標(biāo)準(zhǔn)曲線。

Ct＜40為陽(yáng)性結(jié)果。Ct≥40為陰性結(jié)果。

示意圖：