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免疫(共)沉淀——命中注定我愛你!

閱讀:3220      發(fā)布時間:2019-1-9
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愛必信absin免疫(共)沉淀(IP/CoIP)試劑盒(貨號:abs955),現(xiàn)兩件6折、100T僅需3000元!截止2019年1月11日。

免疫共沉淀(CoIP)是研究蛋白質(zhì)相互作用的經(jīng)典方法,其基于抗體和蛋白的特異性親和作用,通過捕獲與蛋白或抗原特異性結(jié)合的抗體,進而從復雜的樣品中捕獲及富集目標蛋白,同時可以測定與之相互作用的蛋白或其它生物大分子。

免疫沉淀(IP)則主要是利用抗體特異性反應純化富集目的蛋白的一種方法。

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(互作蛋白A和B,與對應抗體結(jié)合后,再與偶聯(lián)beads的Protein A/G結(jié)合)

免疫(共)沉淀(IP/CoIP)主要實驗流程見上圖:

(1)轉(zhuǎn)染表達目的蛋白的質(zhì)粒后,后續(xù)主要是轉(zhuǎn)染表達目的蛋白的質(zhì)粒(2)對樣本的裂解處理,(3)蛋白和抗體、珠子的孵育,(4)免疫復合物沉淀洗滌之后,(5)再進行后續(xù)分析,常規(guī)是做WB,也有用質(zhì)譜分析的。

可以看出,CoIP本身的實驗流程并不復雜,只是為了拿到靠譜又漂亮的結(jié)果、需要我們不斷優(yōu)化實驗條件,包括裂解液的選擇、抗體的選擇、Protein A與G的選擇和使用量、beads的選擇等。

小編收集了以下常見的免疫(共)沉淀需注意點:

1.   細胞裂解采用溫和的裂解條件,不能破壞細胞內(nèi)存在的蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用,多采用非離子變性劑(NP40 或Triton X-100)。每種細胞的裂解
      條件是不同的,需要通過經(jīng)驗和試驗確定。不能用高濃度的變性劑(0.2%SDS),細胞裂解液中要加各種酶抑制劑。

2.  免疫(共)沉淀需要注意點就是抗體的性質(zhì)??贵w不同、其和抗原的結(jié)合能力也不同,WB、IHC能結(jié)合未必能用在IP反應。建議仔細檢查抗體的
     說明書。特別是多抗的特異性是問題。

3.  需充分考慮抗體/緩沖液的比例??贵w過少則不能檢出抗原,過多則不能沉降在beads上,殘存在上清。緩沖劑太少則不能溶解抗原,過多則抗原
     被稀釋。

4.  如果拿到免疫復合物后用WB檢驗,必須在實驗前預測目的蛋白是什么,以選擇后檢測的抗體,若預測不正確,實驗就得不到結(jié)果,實驗本身具有
     冒險性。

 

那么做CoIP,我們需要拿到怎樣的實驗驗證結(jié)果、從而有效證明我們的猜測呢?

Figure from INMAP Overexpression Inhibits Cell Proliferation, Induces Genomic Instability and Functions through p53/p21 Pathways , Zhu Y et al.PLoS One. 2015 Jan 30;10(1)

 

上圖是CoIP驗證實驗的典型結(jié)果圖片。INMAP是一個在有絲分裂中起重要作用的蛋白,保證了紡錘體和端粒的完整性,作者通過CoIP驗證研究了INMAP通過P53/P21途徑起作用。

文章的C和D圖中,研究者分別使用Flag單抗和p21抗體,拉下目的蛋白及其互作蛋白后,通過Input的陽性、control組normal lgG的陰性和終WB分析互作蛋白的陽性,充分驗證、結(jié)論令人信服!

 

所以,命中注定的愛情、果然還是需要經(jīng)過層層考驗驗證吶!

 

愛必信作為一個致力于為中國科研事業(yè)服務的中國品牌,我們開發(fā)的明星爆款產(chǎn)品免疫(共)沉淀(IP/CoIP)試劑盒采用蛋白特異結(jié)合能力*的ProteinA、ProteinG為捕獲載體,目的蛋白捕獲能力高,試驗結(jié)果重復性和一致性均得到有效驗證。

 

abs955 免疫(共)沉淀(IP/CoIP)試劑盒組分如下:

試劑組分包裝規(guī)格
Lysis buffer30ml*1
10*Wash buffer50ml*1
1*SDS 樣品緩沖液1ml*1
Protein A 瓊脂糖珠250μl*1
Protein G 瓊脂糖珠250μl*1

我們的產(chǎn)品優(yōu)勢:

1. 采用Protein A、Protein G作為捕獲載體,更加節(jié)省抗體;

3. 主要輔助試劑均包含在內(nèi),一站式解決IP/CoIP實驗煩惱;

5. 高性價比,足夠?qū)嶒?0次!

 2. 試劑盒內(nèi)組分及操作流程經(jīng)實驗優(yōu)化,確保更高的檢測靈敏度;
4. 實驗結(jié)果重復性好;


目前愛必信免疫共沉淀試劑盒團購*、2件6折,截止2019年1月11日不要錯過哦。

   貨號   產(chǎn)品名稱   規(guī)格   原價   *   貨期
   abs955   免疫(共)沉淀(IP/CoIP)試劑盒   50tests×2   2500×2   1500×2   現(xiàn)貨

 

愛必信特色產(chǎn)品線(全部現(xiàn)貨):
二抗、標簽抗體、對照抗體;WB相關:ECL發(fā)光液、預染marker、預制膠;IHC相關:二抗試劑盒、組化筆;IP/CoIP試劑盒;細胞因子、信號通路調(diào)節(jié)劑;血清、BSA、蛋白酶K、CTB、TTX、CEE;凋亡試劑盒、呼吸爆發(fā)試劑盒;動植物提取物,定制服務(抗體/多肽/蛋白)...

 

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