PMA(TPA)佛波酯是一種廣泛用于體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)的佛波酯(phorbol ester) PKC激活劑。PMA結(jié)合PKC(Ki =2.6 nM)并激活其功能，在細(xì)胞和組織中都呈現(xiàn)出極其廣的抑制譜。PMA可以抑制Fas誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡，但又可以誘導(dǎo)HL-60細(xì)胞的凋亡。PMA是一種高效的腫瘤促進(jìn)劑，可以促進(jìn)小鼠皮膚瘤的形成。盡管PMA毒性較強(qiáng)，但是在人體內(nèi)仍顯示出抗白血病和抗中性白細(xì)胞減少的活性。

圖一. PMA結(jié)構(gòu)圖

體外研究 ：為了檢查PKC在p38MAPK磷酸化中的作用，用PKC活化劑PMA（100nM）刺激細(xì)胞，其模擬PKC的天然活化劑DAG與PKC的C1區(qū)的結(jié)合。在與αT3-1細(xì)胞中GnRH觀察到的類似的兩種細(xì)胞類型中觀察到PMA的p38MAPK磷酸化，即緩慢的持續(xù)激活（分別在30分鐘時(shí)為3.2倍和3.6倍）。由GnRH和PMA激活的PKC在p38MAPK磷酸化中起不同作用的矛盾發(fā)現(xiàn)可以通過PKC的差異定位來解釋。 αT3-1細(xì)胞中p38MAPK磷酸化的基礎(chǔ)，GnRH-和PMA-刺激是通過電壓門控Ca2 +通道和Ca2 +動(dòng)員的Ca2 +流入介導(dǎo)的，而在分化的LβT2促性腺細(xì)胞中，它僅通過Ca2 +動(dòng)員介導(dǎo)[2]。 

體內(nèi)研究： PMA是PKC激動(dòng)劑，其逆轉(zhuǎn)由5-羥基癸酸（5-HD）誘導(dǎo)的損傷。因此，mitoKATP的激活通過PKC途徑保護(hù)SOD和MDA中的線粒體功能[3]。

細(xì)胞實(shí)驗(yàn)：αT3-1和LβT-2細(xì)胞在補(bǔ)充有10％胎牛血清（FCS）和L-谷氨酰胺2mM，青霉素和鏈霉素（100單位/ mL）的DMEM中在37℃加濕培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5％CO2培養(yǎng)。 C。在同一培養(yǎng)基中血清饑餓為0.1％FCS，持續(xù)16小時(shí)。然后如所示，將GnRH和PMA添加一段時(shí)間。通常，αT3-1細(xì)胞通過ExGen 500或jetPRIME瞬時(shí)轉(zhuǎn)染，而LβT2細(xì)胞僅通過jetPRIME轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染。對(duì)于顯性陰性（DN）PKC的實(shí)驗(yàn)，用1.5μgp38α-GFP和3μg對(duì)照載體，pCDNA3或3μgDN-PKC構(gòu)建體轉(zhuǎn)染αT3-1細(xì)胞（在6cm平板中）。對(duì)于LβT2細(xì)胞，用4μgp38α-GFP以及9μg對(duì)照載體，pCDNA3或9μgDN-PKC構(gòu)建體進(jìn)行轉(zhuǎn)染（在10cm平板中）。轉(zhuǎn)染后約30小時(shí)，將細(xì)胞血清饑餓（0.1％FCS）16小時(shí)，然后用GnRH或PMA刺激，用冰冷的PBS洗滌兩次，用裂解緩沖液處理，然后進(jìn)行一次凍融循環(huán)。收獲細(xì)胞;離心（15,000×g，15分鐘，4℃）后，取上清液進(jìn)行免疫沉淀實(shí)驗(yàn)[2]。

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)：大鼠[3]所有實(shí)驗(yàn)均用雄性Wistar大鼠（體重250-280g）進(jìn)行。將125只Wistar大鼠隨機(jī)分成7組。 （1）假手術(shù)組（n = 21）給予側(cè)腦室注射0.9％生理鹽水; （2）IR組大鼠（n = 21）在大腦中動(dòng)脈閉塞（MCAO）前30 min給予側(cè)腦室注射0.9％生理鹽水; （3）在MCAO前30分鐘，給予Carbenoxolone（CBX）組（n = 21）大鼠側(cè)腦室注射CBX（5μg/ mL×10μL）; （4）在MCAO之前30分鐘，給二氮嗪（DZX）組（n = 21）的大鼠腹側(cè)注射DZX（2mM×30μL）; （5）對(duì)5-HD組（n = 21）的大鼠進(jìn)行5-HD（100mM×10μL）的側(cè)腦室注射，10分鐘后，在MCAO前15分鐘注射DZX; （6）給DZX + Ro組大鼠（n = 15）注射DZX側(cè)腦室，10分鐘后，在MCAO前15分鐘注射Ro-31-8425（400μg/ kg）; （7）注射5-HD和DZX后，給5-HD + PMA組（n = 15）的大鼠腹膜內(nèi)注射PMA（200μg/ kg）。 
 

參考文獻(xiàn) ：
[1]. Xu F, et al. Protein kinase C-mediated Ca2+ entry in HEK 293 cells transiently expressing human TRPV4. Br J Pharmacol. 2003 Sep;140(2):413-21. 
[2]. Mugami S, et al. Differential roles of PKC isoforms (PKCs) and Ca2+ in GnRH and phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA) stimulation of p38MAPK phosphorylation in immortalized gonadotrope cells. Mol Cell Endocrinol. 2017 Jan 5;439:141-154. 
[3]. Hou S, et al. Mechanism of Mitochondrial Connexin43's Protection of the Neurovascular Unit under Acute Cerebral Ischemia-Reperfusion Injury. Int J Mol Sci. 2016 May 5;17(5). pii: E679. 
[4]. Zhang T, et al. MPTP-Induced Dopamine Depletion in Basolateral Amygdala via Decrease of D2R Activation Suppresses GABAA Receptors Expression and LTD Induction Leading to Anxiety-Like Behaviors. Front Mol Neurosci. 2017 Aug 7;10:247. 

佛波酯(PMA)產(chǎn)品相關(guān)規(guī)格及價(jià)格：

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Absin特色產(chǎn)品線：WB相關(guān)：ECL發(fā)光液、預(yù)染marker、預(yù)制膠；IHC相關(guān)：二抗試劑盒、組化筆；IP/CoIP試劑盒；激動(dòng)劑/抑制劑；血清、BSA、蛋白酶K、CTB、TTX、CEE；凋亡試劑盒；呼吸爆發(fā)試劑盒；ELISA試劑盒；重組蛋白；抗體: 二抗、標(biāo)簽抗體、對(duì)照抗體；定制服務(wù)(抗體/多肽/蛋白/標(biāo)記/檢測(cè))...