腫瘤的免疫主要是T細(xì)胞來(lái)執(zhí)行的，T細(xì)胞是我們體內(nèi)進(jìn)化的最高等，也是最多樣的一類細(xì)胞。T細(xì)胞的多樣性由于TCR的豐富多樣，本質(zhì)上由V(D)J重組導(dǎo)致，T細(xì)胞受體識(shí)別靶細(xì)胞表面特異性抗原，一個(gè)抗原就對(duì)應(yīng)著一個(gè)T細(xì)胞克隆，可達(dá)10¹⁵-10¹⁸種，每個(gè)克隆都具有特殊的TCR。通過(guò)正選擇和負(fù)選擇的進(jìn)一步篩選，最終形成大約10⁶到10¹⁰種的循環(huán)T細(xì)胞克隆。其中大概一般可能有幾萬(wàn)種到幾十萬(wàn)種。是可以識(shí)別腫瘤抗原的，叫腫瘤抗原特性T細(xì)胞。

TCR結(jié)構(gòu)示意圖

腫瘤抗原特異性T細(xì)胞檢測(cè)之前必須要了解一下腫瘤免疫循環(huán)理論，它涉及到我們的樣本來(lái)源。根據(jù)腫瘤免疫循環(huán)理論，癌細(xì)胞釋放腫瘤抗原。腫瘤抗原被抗原遞呈細(xì)胞吞噬之后，抗原遞呈細(xì)胞就會(huì)歸巢，回流到我們的引流淋巴結(jié)，在引流淋巴結(jié)內(nèi)，抗原被抗原遞呈細(xì)胞吞噬處理之后就會(huì)激活。可以被腫瘤抗原的腫瘤抗原特性T細(xì)胞識(shí)別，這個(gè)腫瘤抗原特性T細(xì)胞一旦被激活成熟之后。就會(huì)進(jìn)入血液循環(huán)，從而去尋找它的殺傷目標(biāo)。當(dāng)它循環(huán)到腫瘤組織中，發(fā)現(xiàn)腫瘤組織中有對(duì)應(yīng)的腫瘤抗原，就會(huì)浸潤(rùn)到腫瘤組織內(nèi)去殺死腫瘤細(xì)胞，這叫腫瘤免疫循環(huán)。所以我們機(jī)體內(nèi)有三個(gè)位置是有腫瘤抗原性T細(xì)胞的，引流淋巴結(jié)、外流血和腫瘤組織。

癌癥-免疫周期

腫瘤抗原特性T細(xì)胞理論上來(lái)說(shuō)分為三大類，一類可以識(shí)別腫瘤腫瘤抗原，可以殺死這個(gè)被識(shí)別的含有腫瘤抗原的腫瘤細(xì)胞，這類我們叫做效應(yīng)性腫瘤抗原T細(xì)胞，第二大類就是調(diào)節(jié)型腫瘤抗原T細(xì)胞，這類細(xì)胞可以識(shí)別腫瘤抗原，但是對(duì)癌細(xì)胞沒(méi)有殺傷功能，反而因?yàn)樗鼤?huì)抑制T effect，從而間接促進(jìn)癌細(xì)胞的生長(zhǎng)。第三大類是無(wú)能型T細(xì)胞，它可以識(shí)別腫瘤，抗原，也可以識(shí)別癌細(xì)胞，但識(shí)別癌細(xì)胞之后，不具有殺傷功能。

腫瘤抗原特性T細(xì)胞，是我們機(jī)體內(nèi)去特異性識(shí)別和殺傷癌細(xì)胞的最主要的細(xì)胞。腫瘤細(xì)胞跟正常的細(xì)菌和病毒最大的區(qū)別就是具有高度異質(zhì)性，沒(méi)有占主導(dǎo)地位的抗原，很難找到共有通用占主導(dǎo)地位抗原，這也是開(kāi)發(fā)腫瘤疫苗最大的一個(gè)難點(diǎn)，89年研究者發(fā)現(xiàn)了一類可以特異性識(shí)別某些腫瘤抗原的T細(xì)胞，但目前為止種類不是很多。

腫瘤抗性特性T細(xì)胞檢測(cè)的應(yīng)用和檢測(cè)意義有哪些呢？

1）癌癥免疫治療藥物研究（PD1抗體、雙特異性抗體等）：經(jīng)過(guò)藥物治療后是否增加了腫瘤抗原特異性T細(xì)胞的數(shù)量和總含量；

2）新藥物研發(fā)、聯(lián)合用藥等（該治療方法，尤其是化療是否影響了機(jī)體內(nèi)抗原特異性T細(xì)胞的總含量）；

3）溶瘤病毒研究等（溶瘤病毒殺死癌細(xì)胞后是否增加了機(jī)體內(nèi)腫瘤抗原特異性T細(xì)胞的含量）；

4）癌癥疫苗研發(fā)（新抗原疫苗、mRNA疫苗、DC疫苗等是否誘導(dǎo)了足夠的腫瘤抗原特異性T細(xì)胞）；

5）癌癥納米治療藥物研發(fā)（很多納米藥物或者免疫調(diào)節(jié)劑通過(guò)誘發(fā)ICD效應(yīng)發(fā)揮作用，如果誘導(dǎo)產(chǎn)生了ICD效應(yīng)，應(yīng)該能增加腫瘤抗原特異性T細(xì)胞的總含量）；

6）放射治療：對(duì)腫瘤組織不同劑量的放射量（是否能夠通過(guò)放射治療誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生更多的腫瘤抗原特異性T細(xì)胞）；

7）光熱治療：通過(guò)光敏劑、熱敏劑等殺死癌細(xì)胞后，癌細(xì)胞釋放的抗原是否誘導(dǎo)產(chǎn)生了更多的腫瘤抗原特異性T細(xì)胞。

目前市面上主流的腫瘤抗原特異性T細(xì)胞檢測(cè)技術(shù)是1996年，美國(guó)斯坦福大學(xué)John D. Altman博士等人開(kāi)發(fā)出的MHC-抗原肽復(fù)合物四聚體（簡(jiǎn)稱：MHC 四聚體）技術(shù)。由于TCR與MHC-抗原肽復(fù)合物之間的親和力低，半衰期短，相互結(jié)合后容易快速脫落，重組的可溶性MHC-抗原肽復(fù)合物單體并不適合用于抗原特異性的T細(xì)胞檢測(cè)。

該技術(shù)由4個(gè)MHC-抗原肽單體分子及熒光染料組成的復(fù)合物，它以帶有信號(hào)標(biāo)記的鏈霉親合素為基礎(chǔ)，交聯(lián)四個(gè)MHC分子單體，形成MHC四聚體；與其他應(yīng)用于T細(xì)胞檢測(cè)的傳統(tǒng)方法相比，如酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)檢測(cè)(ELISPOT)、單細(xì)胞PCR等，MHC四聚體分析技術(shù)具有：

1）特異性高；

2）穩(wěn)定性好；

3）多樣化/個(gè)性化：可定制，合成特異的抗原多肽片段，組合成各種 T 細(xì)胞選擇性MHC四聚體；

4）定性/定量分析的優(yōu)勢(shì)

MHC-抗原肽復(fù)合物四聚體技術(shù)

但是MHC四聚體和ELISPOT技術(shù)存在一些局限：

1）可以使用的抗原肽數(shù)量非常有限，因而只能檢測(cè)幾種特定克隆的抗原特異性T細(xì)胞；

2）可以檢測(cè)到的抗原特異性T細(xì)胞種類有限，含量偏低；

3）所使用的抗原肽可能在檢測(cè)機(jī)體內(nèi)沒(méi)有相應(yīng)的抗原特異性T細(xì)胞；

4）檢測(cè)的可能不是占主導(dǎo)地位的抗原特異性T細(xì)胞和含量最多的抗原特異性T細(xì)胞；

5）檢測(cè)的抗原特異性T細(xì)胞不全面、不準(zhǔn)確；

6）價(jià)格昂貴；

7）四聚體技術(shù)只能檢測(cè)結(jié)構(gòu)上可以識(shí)別相應(yīng)多肽的T細(xì)胞，但是是否有殺傷功能無(wú)法確認(rèn)，因而不能進(jìn)行功能確認(rèn)。

Absin腫瘤抗原特異性T細(xì)胞含量檢測(cè)刺激試劑盒

本產(chǎn)品檢測(cè)納米顆粒負(fù)載癌細(xì)胞的全細(xì)胞抗原，抗原種類全面、多樣和廣譜，可全面準(zhǔn)確檢測(cè)不同組織中的腫瘤抗原特異性T細(xì)胞。具有特異性高，準(zhǔn)確性高，所檢測(cè)腫瘤抗原特異性T細(xì)胞種類全面等優(yōu)點(diǎn)。測(cè)試的結(jié)果顯示使用負(fù)載B16F10腫瘤組織全細(xì)胞抗原的納米粒與小鼠脾細(xì)胞單細(xì)胞懸液共孵育激活腫瘤抗原特異性T細(xì)胞后，在CD3+T細(xì)胞中可以表達(dá)IFN-γ的T細(xì)胞比例比負(fù)載8種B16F10的新抗原多肽的納米粒、以及游離的B16F10腫瘤組織裂解液要多，也更全面。

Absin腫瘤抗原特異性T細(xì)胞含量檢測(cè)刺激試劑盒測(cè)試結(jié)果快問(wèn)快答：

1）該試劑盒中的納米粒是否會(huì)作為刺激物，刺激樣本產(chǎn)生新的種類的腫瘤抗原特異性T細(xì)胞？

不會(huì)，腫瘤免疫循環(huán)一般只有在體內(nèi)才會(huì)完成

2）不使用二次激活物（多肽或者試劑盒中的納米粒）是否可以直接檢測(cè)樣本中的腫瘤抗原特異性T細(xì)胞？

不行，或者效果很差，樣本不經(jīng)過(guò)二次激活所檢測(cè)的腫瘤抗原特異性T細(xì)胞非常少或沒(méi)有。

3）能否直接用腫瘤組織裂解液作為二次激活物？

效果不好，從我們的驗(yàn)證數(shù)據(jù)中可以得到答案。

4）我想要檢測(cè)的腫瘤類型或者物種沒(méi)有怎么辦？

愛(ài)必信提供定制服務(wù)，除腫瘤外，各種傳染病病原也可進(jìn)行磁珠包被，但需要客戶提供抗原，詳情可點(diǎn)擊腫瘤/傳染病抗原特異性T細(xì)胞含量檢測(cè)刺激物定制查看。

5）每種腫瘤都有不修飾、OVA修飾和fluc修飾三種盒子，該如何選擇？

與構(gòu)建腫瘤模型時(shí)是否修飾有關(guān)，建議相匹配。

6）小鼠樣本建議是用什么組織樣本進(jìn)行測(cè)試？

優(yōu)先推薦使用脾臟，血液中含量較少，可能需要多個(gè)小鼠血液混合才能達(dá)到數(shù)量要求。

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