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抗體親和純化填料解決方案

閱讀：329 發(fā)布時(shí)間：2025-2-14
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一、背景介紹

◆ 蛋白A是???葡萄球菌的細(xì)胞壁中的表?蛋?，它由折疊成三螺旋束的五個(gè)同源Ig結(jié)合域組成；
◆ 蛋白G是G、C型鏈球菌細(xì)胞壁中的?種蛋?質(zhì)；
◆ 蛋白A/G是重組蛋?A蛋?G融合蛋?，融合了來(lái)?蛋?A的5個(gè)Fc結(jié)合域和蛋?G的3個(gè)Fc結(jié)合域；
◆ 蛋白L來(lái)源于?消化鏈球菌，并通過(guò)L鏈相互作?與免疫球蛋?結(jié)合。

圖1 抗體與抗體親和配基的作用區(qū)域

表1 蛋白A、G、L的抗體親和性差異分析

蛋白A
蛋白G
蛋白A/G
蛋白L
優(yōu)點(diǎn)
結(jié)合位點(diǎn)在CH2和CH3結(jié)構(gòu)域之間的Fc區(qū)域，以及? VH3家族的Fab區(qū)內(nèi)的重鏈

可以特異性地同免疫球蛋?IgG分?的Fc段結(jié)合?不影響其Fab段與抗原分?結(jié)合的能?
可以與?的所有IgG亞型、IgA、IgE、IgM結(jié)合。蛋?A/G降低了對(duì)pH的依賴，允許在pH 5-8進(jìn)?結(jié)合
只與抗體的κ輕鏈結(jié)合?不會(huì)影響抗體的抗原結(jié)合位點(diǎn)。可以結(jié)合更?泛的抗體類別，如?類的IgG、IgM、IgA、IgE、IgD，以及含κ輕鏈(?類1,3,4型，??1型)的Fab、scFv等抗體?段
缺點(diǎn)

不能與??的IgA、IgM和?清?蛋?結(jié)合
不結(jié)合?、??或綿?來(lái)源的免疫球蛋?
應(yīng)用
免疫球蛋?的純化、固定或檢測(cè)領(lǐng)域
從?清中分離并純化或去除IgG、單克隆抗體的純化和抗原抗體復(fù)合物的分離等
?IgG單抗的提取和檢測(cè)
從添加BSA或FCS的培養(yǎng)液中純化單克隆抗體，也?泛?于基因改造?程化抗體的純化分離

表2 抗體親和配基與不同來(lái)源及亞型抗體之間的親和?

種類
亞型
蛋白A
蛋白G
蛋白A/G
蛋白L
人
IgG1
+++
+++
+++
+++
IgG2
+++
+++
+++
+++
IgG3
+
+++
+++
+++
IgG4
+++
+++
+++
+++
IgM
+
-
+
+++
IgD
-
-
-
+++
IgA
+
-
+
+++
Fab
+
+
+
+++
小鼠
IgG1
+
++
++
+++
IgG2a
+++
+++
+++
+++
IgG2b
+++
+++
+++
+++
IgG3
+++
+++
+++
+++
IgM
-
-
-
+++
大鼠
IgG1
+
++
++
+++
IgG2a
-
+++
+++
+++
IgG2b
-
+
+
+++
IgG2c
+++
+++
+++
+++
牛
IgG1
+
+++
+++
-
IgG2
+++
+++
+++
-
山羊
IgG1
+
+++
+++
-
IgG2
+++
+++
+++
-
馬
IgG(ab)
+
-
+
NA
IgG(c)
+
-
+
NA
IgG(T)
-
+++
+++
NA
兔
IgG
+++
+++
+++
+
豬
IgG
+++
+
+++
+++
狗
IgG
+++
+
+++
NA
雞
IgY
-
-
-
-

注：- 表示不包含；+ 表示中標(biāo)組合；+++ 表示錯(cuò)誤組合；NA 表示不適用或數(shù)據(jù)不可用。

二、抗體親和純化填料參數(shù)

類別
重組蛋白A瓊脂糖凝膠FF
重組蛋白G瓊脂糖凝膠FF
重耐堿蛋白A瓊脂糖凝膠FF
蛋白A/G瓊脂糖凝膠FF
重組蛋白L瓊脂糖凝膠FF
基質(zhì)
4%交聯(lián)瓊脂糖
4%交聯(lián)瓊脂糖
4%交聯(lián)瓊脂糖
4%交聯(lián)瓊脂糖
4%交聯(lián)瓊脂糖
配基
重組金黃色葡萄球菌蛋白A，≥6mg/mL
重組鏈球菌蛋白G，≥6mg/mL，單點(diǎn)偶聯(lián)
重組耐堿蛋白A，≥6mg/mL
蛋白A蛋白G融合蛋白，≥6mg/mL
重組大消化鏈球菌蛋白L，≥6 mg/mL
粒徑范圍^a
45-165μm
平均粒徑
~90μm
動(dòng)態(tài)結(jié)合載量^b
≥40mg h-IgG/mL
≥40mg h-IgG/mL
≥45mg h-IgG/mL
≥40mg h-IgG/mL
≥40mg k輕鏈h-IgG/mL
推薦工作流速^c
60-300cm/h
60-300cm/h
60-300cm/h
60-150cm/h
60-300cm/h
最大流速與壓力^d
＞900cm/h
使用 pH
3-10(推薦的工作pH),3-12(短期穩(wěn)定)
3-9(推薦的工作pH),2-10(短期穩(wěn)定)
3-10(推薦的工作pH),3-12(短期穩(wěn)定)
3-10(推薦的工作pH),3-12(短期穩(wěn)定)
2-9(推薦的工作pH),15mM NaOH(CIP)
化學(xué)穩(wěn)定性
在以下溶液中穩(wěn)定：常用的水相緩沖液、10-100mmol/L NaOH、6mol/L鹽酸胍、70%乙醇。
在以下溶液中穩(wěn)定：常用的水相緩沖液、6mol/L鹽酸胍、70%乙醇。
在以下溶液中穩(wěn)定：常用的水相緩沖液、0.1-0.5mol/L氫氧化鈉、6 mol/L鹽酸胍、70%乙醇等。
在以下溶液中穩(wěn)定：常用的水相緩沖液、0.1-0.5mol/L氫氧化鈉、6mol/L 鹽酸胍、70%乙醇等。
在以下溶液中穩(wěn)定：常用的水相緩沖液、6mol/L鹽酸胍、70% 乙醇。

注：
a：90%體積以上的微球在此粒徑范圍；
b：DBC10%測(cè)試條件為：10%流穿，6min停留時(shí)間；
c：推薦流速是指該流速可滿足大部分柱高下2-6min停留時(shí)間的使用條件，并非只能在該流速范圍內(nèi)工作；
d：10cm柱高下的最大測(cè)試流速。

三、應(yīng)用數(shù)據(jù)

圖2 工藝溶劑穩(wěn)定性

圖3 不同蛋?A填料對(duì)NaOH的耐受性

圖4 不同蛋?G填料的洗脫曲線，樣品為h-IgG

圖5 填料：重耐堿蛋白A瓊脂糖凝膠FF(中壓預(yù)裝柱)(Cat: abs91003-M)；
樣品：牛血清，相對(duì)于填料約20mg IgG/mL填料；
上樣、結(jié)合緩沖液： 20mM PB, 150mM NaCl, pH7.4, 10CV；
洗脫緩沖液：100mM甘氨酸，pH3.0，14CV；
在位清洗(CIP)：100mM NaOH，10CV

四、愛必信抗體親和純化填料產(chǎn)品信息

貨號(hào)
產(chǎn)品名稱
規(guī)格
abs91001-F
重組蛋白A瓊脂糖凝膠FF
10mL/100mL
abs91001-G
重組蛋白A瓊脂糖凝膠FF(重力預(yù)裝柱)
1mL/5mL
abs91001-M
重組蛋白A瓊脂糖凝膠FF(中壓預(yù)裝柱)
1mL/5mL
abs91002-F
重組蛋白G瓊脂糖凝膠FF
10mL/100mL
abs91002-G
重組蛋白G瓊脂糖凝膠FF(重力預(yù)裝柱)
1mL/5mL
abs91002-M
重組蛋白G瓊脂糖凝膠FF(中壓預(yù)裝柱)
1mL/5mL
abs91003-F
重耐堿蛋白A瓊脂糖凝膠FF
10mL/100mL
abs91003-M
重耐堿蛋白A瓊脂糖凝膠FF(中壓預(yù)裝柱)
1mL/5mL
abs91003-G
重耐堿蛋白A瓊脂糖凝膠FF(重力預(yù)裝柱)
1mL/5mL
abs91004-F
蛋白A/G瓊脂糖凝膠FF
10mL/100mL
abs91004-M
蛋白A/G瓊脂糖凝膠FF(中壓預(yù)裝柱)
1mL/5mL
abs91004-G
蛋白A/G瓊脂糖凝膠FF(重力預(yù)裝柱)
1mL/5mL
abs91005-F
易洗脫蛋白G瓊脂糖凝膠FF
10mL/100mL
abs91005-M
易洗脫蛋白G瓊脂糖凝膠FF(中壓預(yù)裝柱)
1mL/5mL
abs91005-G
易洗脫蛋白G瓊脂糖凝膠FF(重力預(yù)裝柱)
1mL/5mL
abs91006-F
重組蛋白L瓊脂糖凝膠FF
10mL/100mL
abs91006-M
重組蛋白L瓊脂糖凝膠FF(中壓預(yù)裝柱)
1mL/5mL
abs91006-G
重組蛋白L瓊脂糖凝膠FF(重力預(yù)裝柱)
1mL/5mL

參考文獻(xiàn)
[1] Arora S, Saxena V, Ayyar BV. Affinity chromatography: A versatile technique for antibody purification. Methods. 2017 Mar 1;116:84-94. doi: 10.1016/j.ymeth.2016.12.010. Epub 2016 Dec 22. PMID: 28012937.

Absin產(chǎn)品線：
爆款產(chǎn)品：試劑盒(mIHC、IHC、凋亡、ELISA、ChIP、Co-IP、TR-FRET、生化檢測(cè)、殘留檢測(cè)、多因子檢測(cè))；細(xì)胞培養(yǎng)(類器官試劑盒+基質(zhì)膠，胎牛血清+培養(yǎng)添加劑+細(xì)胞因子)、分化試劑盒；分子(mRNA合成服務(wù)+提取試劑盒)；化合物大包裝；輔助試劑、耗材/儀器、定制服務(wù)(抗體/多肽/蛋白/標(biāo)記/檢測(cè))...
特色產(chǎn)品：雞胚提取物CEE、B27、N2、霍亂毒素B亞單位CTB、牛腦垂體提取物BPE、百日咳毒素PTX、重組人胰島素Insulin、人源低密度脂蛋白LDL...

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提示

	蛋白A	蛋白G	蛋白A/G	蛋白L
優(yōu)點(diǎn)	結(jié)合位點(diǎn)在CH2和CH3結(jié)構(gòu)域之間的Fc區(qū)域，以及? VH3家族的Fab區(qū)內(nèi)的重鏈	可以特異性地同免疫球蛋?IgG分?的Fc段結(jié)合?不影響其Fab段與抗原分?結(jié)合的能?	可以與?的所有IgG亞型、IgA、IgE、IgM結(jié)合。蛋?A/G降低了對(duì)pH的依賴，允許在pH 5-8進(jìn)?結(jié)合	只與抗體的κ輕鏈結(jié)合?不會(huì)影響抗體的抗原結(jié)合位點(diǎn)。可以結(jié)合更?泛的抗體類別，如?類的IgG、IgM、IgA、IgE、IgD，以及含κ輕鏈(?類1,3,4型，??1型)的Fab、scFv等抗體?段
缺點(diǎn)			不能與??的IgA、IgM和?清?蛋?結(jié)合	不結(jié)合?、??或綿?來(lái)源的免疫球蛋?
應(yīng)用	免疫球蛋?的純化、固定或檢測(cè)領(lǐng)域	從?清中分離并純化或去除IgG、單克隆抗體的純化和抗原抗體復(fù)合物的分離等	?IgG單抗的提取和檢測(cè)	從添加BSA或FCS的培養(yǎng)液中純化單克隆抗體，也?泛?于基因改造?程化抗體的純化分離

種類	亞型	蛋白A	蛋白G	蛋白A/G	蛋白L
人	IgG1	+++	+++	+++	+++
	IgG2	+++	+++	+++	+++
	IgG3	+	+++	+++	+++
	IgG4	+++	+++	+++	+++
	IgM	+	-	+	+++
	IgD	-	-	-	+++
	IgA	+	-	+	+++
	Fab	+	+	+	+++
小鼠	IgG1	+	++	++	+++
	IgG2a	+++	+++	+++	+++
	IgG2b	+++	+++	+++	+++
	IgG3	+++	+++	+++	+++
	IgM	-	-	-	+++
大鼠	IgG1	+	++	++	+++
	IgG2a	-	+++	+++	+++
	IgG2b	-	+	+	+++
	IgG2c	+++	+++	+++	+++
牛	IgG1	+	+++	+++	-
牛	IgG2	+++	+++	+++	-
山羊	IgG1	+	+++	+++	-
山羊	IgG2	+++	+++	+++	-
馬	IgG(ab)	+	-	+	NA
	IgG(c)	+	-	+	NA
	IgG(T)	-	+++	+++	NA
兔	IgG	+++	+++	+++	+
豬	IgG	+++	+	+++	+++
狗	IgG	+++	+	+++	NA
雞	IgY	-	-	-	-

類別	重組蛋白A瓊脂糖凝膠FF	重組蛋白G瓊脂糖凝膠FF	重耐堿蛋白A瓊脂糖凝膠FF	蛋白A/G瓊脂糖凝膠FF	重組蛋白L瓊脂糖凝膠FF
基質(zhì)	4%交聯(lián)瓊脂糖	4%交聯(lián)瓊脂糖	4%交聯(lián)瓊脂糖	4%交聯(lián)瓊脂糖	4%交聯(lián)瓊脂糖
配基	重組金黃色葡萄球菌蛋白A，≥6mg/mL	重組鏈球菌蛋白G，≥6mg/mL，單點(diǎn)偶聯(lián)	重組耐堿蛋白A，≥6mg/mL	蛋白A蛋白G融合蛋白，≥6mg/mL	重組大消化鏈球菌蛋白L，≥6 mg/mL
粒徑范圍^a	45-165μm
平均粒徑	~90μm
動(dòng)態(tài)結(jié)合載量^b	≥40mg h-IgG/mL	≥40mg h-IgG/mL	≥45mg h-IgG/mL	≥40mg h-IgG/mL	≥40mg k輕鏈h-IgG/mL
推薦工作流速^c	60-300cm/h	60-300cm/h	60-300cm/h	60-150cm/h	60-300cm/h
最大流速與壓力^d	＞900cm/h
使用 pH	3-10(推薦的工作pH),3-12(短期穩(wěn)定)	3-9(推薦的工作pH),2-10(短期穩(wěn)定)	3-10(推薦的工作pH),3-12(短期穩(wěn)定)	3-10(推薦的工作pH),3-12(短期穩(wěn)定)	2-9(推薦的工作pH),15mM NaOH(CIP)
化學(xué)穩(wěn)定性	在以下溶液中穩(wěn)定：常用的水相緩沖液、10-100mmol/L NaOH、6mol/L鹽酸胍、70%乙醇。	在以下溶液中穩(wěn)定：常用的水相緩沖液、6mol/L鹽酸胍、70%乙醇。	在以下溶液中穩(wěn)定：常用的水相緩沖液、0.1-0.5mol/L氫氧化鈉、6 mol/L鹽酸胍、70%乙醇等。	在以下溶液中穩(wěn)定：常用的水相緩沖液、0.1-0.5mol/L氫氧化鈉、6mol/L 鹽酸胍、70%乙醇等。	在以下溶液中穩(wěn)定：常用的水相緩沖液、6mol/L鹽酸胍、70% 乙醇。

貨號(hào)	產(chǎn)品名稱	規(guī)格
abs91001-F	重組蛋白A瓊脂糖凝膠FF	10mL/100mL
abs91001-G	重組蛋白A瓊脂糖凝膠FF(重力預(yù)裝柱)	1mL/5mL
abs91001-M	重組蛋白A瓊脂糖凝膠FF(中壓預(yù)裝柱)	1mL/5mL
abs91002-F	重組蛋白G瓊脂糖凝膠FF	10mL/100mL
abs91002-G	重組蛋白G瓊脂糖凝膠FF(重力預(yù)裝柱)	1mL/5mL
abs91002-M	重組蛋白G瓊脂糖凝膠FF(中壓預(yù)裝柱)	1mL/5mL
abs91003-F	重耐堿蛋白A瓊脂糖凝膠FF	10mL/100mL
abs91003-M	重耐堿蛋白A瓊脂糖凝膠FF(中壓預(yù)裝柱)	1mL/5mL
abs91003-G	重耐堿蛋白A瓊脂糖凝膠FF(重力預(yù)裝柱)	1mL/5mL
abs91004-F	蛋白A/G瓊脂糖凝膠FF	10mL/100mL
abs91004-M	蛋白A/G瓊脂糖凝膠FF(中壓預(yù)裝柱)	1mL/5mL
abs91004-G	蛋白A/G瓊脂糖凝膠FF(重力預(yù)裝柱)	1mL/5mL
abs91005-F	易洗脫蛋白G瓊脂糖凝膠FF	10mL/100mL
abs91005-M	易洗脫蛋白G瓊脂糖凝膠FF(中壓預(yù)裝柱)	1mL/5mL
abs91005-G	易洗脫蛋白G瓊脂糖凝膠FF(重力預(yù)裝柱)	1mL/5mL
abs91006-F	重組蛋白L瓊脂糖凝膠FF	10mL/100mL
abs91006-M	重組蛋白L瓊脂糖凝膠FF(中壓預(yù)裝柱)	1mL/5mL
abs91006-G	重組蛋白L瓊脂糖凝膠FF(重力預(yù)裝柱)	1mL/5mL