在多重?zé)晒饷庖呓M化(mIHC)實(shí)驗(yàn)中,你是否遇到過這些問題:目標(biāo)抗原信號(hào)弱、背景雜光多、甚至組織脫片?這些“翻車現(xiàn)場(chǎng)”的背后,很可能是因?yàn)?strong>抗原修復(fù)液沒選對(duì)!今天,我們就來揭秘不同抗原修復(fù)液的區(qū)別,助你輕松避開實(shí)驗(yàn)“深坑”!
一、為什么抗原修復(fù)液如此重要?
甲醛固定后的組織樣本中,抗原表位常被遮蔽,導(dǎo)致抗體無法結(jié)合。抗原修復(fù)液的作用就是通過特定pH和成分,“撕開”抗原的“保護(hù)罩”,讓目標(biāo)信號(hào)清晰顯現(xiàn)。 但不同抗原的“藏身位置”不同(細(xì)胞核、細(xì)胞膜或細(xì)胞質(zhì)),修復(fù)液的選擇直接影響信號(hào)強(qiáng)度、特異性,甚至決定實(shí)驗(yàn)成?。?/span>
二、4類常用修復(fù)液,到底怎么選?
1、檸檬酸緩沖液(pH6.0)
適用場(chǎng)景:細(xì)胞膜/細(xì)胞質(zhì)抗原(如CK19);
缺點(diǎn):對(duì)核抗原(ER、PR等)修復(fù)能力弱,高溫易導(dǎo)致脫片;
避坑提示:若用于核抗原,可能出現(xiàn)“假陰性”或背景雜光!
2、EDTA緩沖液(pH8.0-9.0)
核抗原的“救星” :如乳腺癌標(biāo)本中的ER、BRCA1,使用EDTA修復(fù)后陽性率顯著提升!
優(yōu)勢(shì):高pH破壞蛋白交聯(lián)更c(diǎn)he底,信號(hào)強(qiáng)且背景干凈。
3、Tris/Tris-EDTA緩沖液(pH9.0-10.0)
敏感型抗原專用:適合弱表達(dá)抗原,尤其接近生理pH(7.0-7.4)的樣本;
注意:長時(shí)間高溫修復(fù)可能損傷組織結(jié)構(gòu)。
4、胰酶法(pH3.5±0.2)
小眾但關(guān)鍵:通過酶解暴露抗原,適合某些特殊表位;
風(fēng)險(xiǎn):過度消化可能破壞組織形態(tài),需嚴(yán)格控制時(shí)間!
三、3個(gè)實(shí)驗(yàn)優(yōu)化技巧
1、修復(fù)液會(huì)“打架”?每輪染色后必須換!
殘留的修復(fù)液可能干擾下一輪抗體結(jié)合,導(dǎo)致信號(hào)交叉污染;
建議:每輪染色后用PBS che底清洗,并更換新鮮修復(fù)液。
2、修復(fù)方式比你想的更關(guān)鍵!
高壓熱修復(fù):適合耐受高溫的樣本,抗原暴露更c(diǎn)he底;
微波修復(fù):溫和但需反復(fù)優(yōu)化時(shí)間,防止局部過熱;
酶解法:適合脆弱組織,但需警惕過度消化;
抗體洗脫液:適合冰凍切片和細(xì)胞爬片的修復(fù)。
3、預(yù)實(shí)驗(yàn)不能?。?/span>
同一份樣本可嘗試不同修復(fù)液對(duì)比,參考指標(biāo):
? 目標(biāo)信號(hào)強(qiáng)度;
? 背景雜光水平;
? 組織完整性(是否脫片)。
四、總結(jié):一張表搞定修復(fù)液選擇
修復(fù)液類型 | 最佳pH | 適用抗原 | 注意事項(xiàng) |
檸檬酸緩沖液(abs9248) | 6.0 | 膜/漿抗原(CK19) | 核抗原慎用,高溫易脫片 |
EDTA緩沖液 | 8.0-9.0 | 核抗原(ER、PR) | 信號(hào)強(qiáng) |
Tris-EDTA(abs9342) | 9.0-10.0 | 弱表達(dá)抗原 | 控制修復(fù)時(shí)間,避免過消化 |
胰酶法 | 3.5±0.2 | 特殊表位抗原 | 嚴(yán)格計(jì)時(shí),防止組織碎裂 |
抗體洗脫液(abs994) | 6.0 | 所有 | 適合冰凍切片,細(xì)胞爬片 |
Absin產(chǎn)品線:
爆款產(chǎn)品:試劑盒(mIHC、IHC、凋亡、ELISA、ChIP、Co-IP、TR-FRET、生化檢測(cè)、殘留檢測(cè)、多因子檢測(cè));細(xì)胞培養(yǎng)(類器官試劑盒+基質(zhì)膠,胎牛血清+培養(yǎng)添加劑+細(xì)胞因子)、分化試劑盒;分子(mRNA合成服務(wù)+提取試劑盒);化合物大包裝;輔助試劑、耗材/儀器、定制服務(wù)(抗體/多肽/蛋白/標(biāo)記/檢測(cè))...
特色產(chǎn)品:雞胚提取物CEE、B27、N2、霍亂毒素B亞單位CTB、牛腦垂體提取物BPE、百日咳毒素PTX、重組人胰島素Insulin、人源低密度脂蛋白LDL...
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