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技術(shù)原理:
多重?zé)晒饷庖呓M化(mIHC),主要的技術(shù)原理來(lái)自TSA技術(shù),TSA即酪酰胺信號(hào)放大(Tyramide signal amplification)是一類利用辣根過(guò)氧化酶(HRP)對(duì)靶蛋白或核酸進(jìn)行高密度原位標(biāo)記的酶學(xué)檢測(cè)方法。該技術(shù)可與高性能染料Alexa Fluor®、傳統(tǒng)熒光染料和比色檢測(cè)系統(tǒng)相兼容。
TSA主要原理是利用酪胺 Tyramide 的過(guò)氧化物酶反應(yīng)(酪胺鹽在HRP催化H2O2下形成共價(jià)鍵結(jié)合位點(diǎn)),產(chǎn)生大量的酶促產(chǎn)物,該產(chǎn)物能與周圍的蛋白殘基(包括色氨酸、組氨酸和酪氨酸殘基)結(jié)合,這樣在抗原-抗體結(jié)合部位就有大量的生物素沉積,與隨后加入的 Streptavidin—HRP/熒光基團(tuán)結(jié)合,經(jīng)幾次這樣的循環(huán)放大,可以結(jié)合大量的酶分子or熒光基團(tuán),結(jié)果使其檢測(cè)信號(hào)得到幾何級(jí)放大。
TSA多重?zé)晒饷庖呓M化染色示意圖
簡(jiǎn)單來(lái)說(shuō),用這種方法做多重?zé)晒馊旧抢枚股蠋в械腍RP(而不是直接偶聯(lián)熒光素),來(lái)催化后續(xù)添加入體系的非活性熒光素。該熒光素在HRP和過(guò)氧化氫的作用下被活化,跟臨近蛋白的酪氨酸殘基共價(jià)偶聯(lián),使得蛋白樣品與熒光素穩(wěn)定結(jié)合。然后進(jìn)行微波處理,前一輪非共價(jià)結(jié)合的抗體被洗掉,共價(jià)結(jié)合的熒光素還留存在樣品上。再換個(gè)一抗來(lái)第二輪孵育,周而復(fù)始。等到所有抗體孵育結(jié)束,熒光素都結(jié)合好后,最后去檢測(cè)結(jié)果。
講座主題:
多重?zé)晒饷庖呓M化在腫瘤免疫治療中的應(yīng)用
講座時(shí)間:
6月29日(本周四)下午15:00-16:00
講座內(nèi)容:
1、多重?zé)晒饷庖呓M化技術(shù)簡(jiǎn)介;
2、多重?zé)晒饷庖呓M化在腫瘤靶向治療中的應(yīng)用;
3、文獻(xiàn)案例解析;
4、Absin多重?zé)晒饷庖呓M化解決方案。
報(bào)名方式:
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