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預(yù)染marker的特性概述

閱讀:1847      發(fā)布時(shí)間:2017-7-21
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  預(yù)染marker可提高特異性的識(shí)別能力。在做westen blot時(shí),用惰性蛋白質(zhì)或非離子去污劑封閉膜上的未結(jié)合位點(diǎn)可以降低抗體的非特異性結(jié)合。封閉劑應(yīng)該封閉所有未結(jié)合位點(diǎn)而不替換膜上的靶蛋白、不結(jié)合靶蛋白的標(biāo)委、也不與抗體或檢測(cè)試劑有交叉反應(yīng)。zui常見(jiàn)的封閉劑是BSA、脫脂奶粉、酪蛋白、明膠和Tween-20(0.05 - 0.1%)稀溶液。
 
  預(yù)染marker還可以在膜上標(biāo)記蛋白分子量,所以吸引了許多實(shí)驗(yàn)室人員購(gòu)買預(yù)染蛋白標(biāo)準(zhǔn)。值得注意的是預(yù)染蛋白Marker與染料共價(jià)耦聯(lián),所以在不同的緩沖條件下電泳時(shí)遷移特性可能會(huì)發(fā)生某些變化,可能導(dǎo)致一些偏差,所以不太適合定位蛋白——不過(guò)多數(shù)情況下Marker的條帶未必能和我們的目標(biāo)蛋白*一樣,我們得到的也不過(guò)是一種相對(duì)Marker指示的參考大小,zui后都需要Western來(lái)定性,所以如果不是要區(qū)分大小相近的條帶,預(yù)染Marker還是很好用的,而且也可以和未染色的蛋白標(biāo)準(zhǔn)一起使用。
 
  預(yù)染marker在電泳過(guò)程中或者轉(zhuǎn)膜時(shí)可以直接觀察到。預(yù)染蛋白分子量的出現(xiàn)方便了我們的實(shí)驗(yàn),這種蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn)可以幫助我們?cè)陔娪緯r(shí)、電泳后,以及轉(zhuǎn)膜后監(jiān)測(cè)電泳情況和估計(jì)遷移率——比如,已知垂直電泳*分辨區(qū)域大約在膠的2/3處,如果使用預(yù)染Marker就可以預(yù)測(cè)目標(biāo)蛋白進(jìn)入*分辨區(qū)時(shí)停止電泳以得到*分辨效果;如果觀察到Marker電泳異常也可以及時(shí)終止電泳;另外在Western Blot轉(zhuǎn)膜以后可以直接觀察蛋白轉(zhuǎn)膜是否*。

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