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上海谷研實(shí)業(yè)有限公司 |
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| 參考價(jià) | 面議 |
更新時(shí)間：2022-04-24 10:29:59瀏覽次數(shù)：218
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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | GOY-01X1389 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工 |
| 主要用途 | 產(chǎn)品僅供科研使用 |
冷凍保存細(xì)胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
| 小鼠肝非實(shí)質(zhì)細(xì)胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X1389 |
商品介紹：
名稱 小鼠肝非實(shí)質(zhì)細(xì)胞 2.組織來源：肝組織 3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 4.細(xì)胞簡(jiǎn)介： 小鼠肝非實(shí)質(zhì)細(xì)胞分離自肝臟組織；肝臟是身體內(nèi)以代謝功能為主的一個(gè)器官，并在身體里面起著去氧化、儲(chǔ)存肝糖、分泌性蛋白質(zhì)的合成等作用；肝臟也消化系統(tǒng)中之膽汁。肝臟是機(jī)體內(nèi)臟里最大的器官，位于機(jī)體中的腹部位置，在右側(cè)橫隔膜之下，位于膽囊之前端且于右邊腎臟的前方，胃的上方。肝臟是機(jī)體消化系統(tǒng)中最大的消化腺，為一紅棕色的V字形器官。肝臟是尿素合成的主要器官，又是新陳代謝的重要器官。肝臟在機(jī)體位置和形態(tài)結(jié)構(gòu)：肝臟位于右上腹，隱藏在右側(cè)膈下和肋骨深面，大部分肝為肋弓所復(fù)蓋，僅在腹上區(qū)、右肋弓間露出并直接接觸腹前壁，肝上面則與膈及腹前壁相接。肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞具有肝功能的單位，是肝臟的基本組成單位之一。肝非實(shí)質(zhì)細(xì)胞是指除了肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞之外的細(xì)胞，主要包含了肝竇內(nèi)皮細(xì)胞、肝星狀細(xì)胞、肝枯否細(xì)胞。 5.方法簡(jiǎn)介： 實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠肝非實(shí)質(zhì)細(xì)胞采用取肝臟灌流、膠原酶消化、密度梯度離心法制備而來制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質(zhì)量檢測(cè)： 實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠肝非實(shí)質(zhì)細(xì)胞經(jīng)過檢測(cè)，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。 7.培養(yǎng)信息： 培養(yǎng)基含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號(hào)CM-M304 換液頻率每2-3天換液一次 生長(zhǎng)特性懸浮 細(xì)胞形態(tài)圓形 傳代特性不增殖；不傳代 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5% |
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
小鼠 MANF / ARMET 細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)
小鼠 SPINK4 細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)
小鼠 VNN1 / Vanin-1 細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)
小鼠 IL1R1 / CD121a 細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)
小鼠 Lactotransferrin / LTF 細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)
小鼠 RANKL / OPGL / TNFSF11 / CD254 細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)
甲型流感 H6N4 (A/chicken/HongKong/17/77) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)
甲型流感 H4N8 (A/chicken/Alabama/1/1975) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)
SCN3B 細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)
NRG1-alpha (ECD) 細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)
小鼠肝非實(shí)質(zhì)細(xì)胞糖原 ≥90% 苯甲 AR,>98.5%(GC)Anti-Phospho-LKB1 (Thr189) /FITC 熒光素標(biāo)記化/蛋白激抗體IgG
甘油 for molecular biology, ≥99%2-叔丁基 99%Anti-LN /FITC 熒光素標(biāo)記層粘連蛋白抗體IgG
甘油 無菌,for molecular biology, ≥99%2,4-二叔丁基酚 97%Anti-Integrin alpha 4,beta 7(LPAM-1)/FITC 熒光素標(biāo)記整合素α4β7抗體IgG
纖維素 80～125mpa.s，25℃ 2,6-二叔丁基酚 98%Anti-HRH3/GPCR97/FITC 熒光素標(biāo)記組織H3受體抗體IgG
順式-4-羥基-L-脯 98%2,4,6-三叔丁基酚 99%Anti-HRH4/GPCR105/FITC 熒光素標(biāo)記組織H4受體抗體IgG
羥賴 97% AR,99.0%Anti-LOX-1/OLR1/FITC 熒光素標(biāo)記凝集素樣氧化型低密度脂蛋白受體抗體IgG
潮霉素B溶液 50mg/ml溶液 ACSAnti-Lpin1 protein/FITC 熒光素標(biāo)記Lpin1 抗體IgG
潮霉素B 超純級(jí) 99.99% metals basisAnti-Lpin1 protein/FITC 熒光素標(biāo)記Lpin1 抗體IgG
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