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詳細(xì)介紹
實驗要點(diǎn)及說明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
| B16-F0 (小鼠黑色素瘤細(xì)胞) | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X0587 |
商品介紹：
名稱 B16-F0 (小鼠黑色素瘤細(xì)胞) 別稱B16/F0; B16F0 種屬小鼠 年齡（性別）不詳 組織來源皮膚 生長特性貼壁細(xì)胞 細(xì)胞形態(tài)上皮細(xì)胞樣 背景描述B16-F0是一株小鼠黑絲素瘤細(xì)胞系。它可在體外常規(guī)傳代培養(yǎng)，產(chǎn)生高濃度的黑色素。可用于分子生物學(xué)中黑色素基因的表達(dá)研究。 生物安全等級1 生長培養(yǎng)基RPMI-1640＋10% FBS＋1% P/S 推薦傳代比例1:4-1:6 推薦換液頻率2~3次/周 凍存條件 凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 溫度：液氮 培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5% 溫度：37℃ 致瘤性Yes, in syngeneic mice 注意事項B16系列細(xì)胞，使用DMEM培養(yǎng)時可能出現(xiàn)黑色素快速積累，細(xì)胞不增殖或死亡的情況，若您需要分泌黑色素相關(guān)實驗可更換為DMEM培養(yǎng)。 |
冷凍保存細(xì)胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大??；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
RMDN1 / FAM82B 基因全長ORF克隆
FGL1 基因全長ORF克隆
TEX264 基因全長ORF克隆
B7-H5 / Gi24 / VISTA 基因全長ORF克隆
GNPTG 基因全長ORF克隆
PSMF1 基因全長ORF克隆
PRRG4 基因全長ORF克隆
OGN 基因全長ORF克隆
FAM131A 基因全長ORF克隆
PCOLCE2 基因全長ORF克隆
B16-F0 (小鼠黑色素瘤細(xì)胞)78-5000 pg/mL 人生長抑制特異性蛋白1(GAS1)ELISA試劑盒
4.69-300 ng/mL 人硫酸類肝素(HS)ELISA試劑盒
0.156-10 ng/mL 人多功能肽2(LMP2)ELISA試劑盒
0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Tumor necrosis factor ligand superfamily member 12
布氏桿菌種子培養(yǎng)基 英文名稱： 產(chǎn)品規(guī)格：250g
膽汁七葉苷瓊脂 英文名稱： 產(chǎn)品規(guī)格：2ml*20支
放線菌培養(yǎng)基(改良高氏1號) 英文名稱：Actinomycetes culture medium 產(chǎn)品規(guī)格：250g
0.312-20 ng/mL 人去唾液酸糖蛋白受體1（ASGPR 1）ELISA試劑盒
0.312-20 ng/mL 人溶血磷脂酸受體4(LPAR4)ELISA試劑盒
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