實驗要點及說明:
1.本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細胞培養(yǎng),懸浮細胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,并經(jīng)過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率;
5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
產(chǎn)品屬性:
商品介紹:
名稱 小鼠嗅球神經(jīng)元細胞 2.組織來源:嗅球組織 3.產(chǎn)品規(guī)格:5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 4.細胞簡介: 小鼠嗅球神經(jīng)元細胞分離自嗅球組織;嗅球是脊椎動物前腦結(jié)構(gòu)中參與嗅覺的部分,用于感知氣味。嗅球分為二個不同的結(jié)構(gòu):主嗅球及輔助嗅球。在大腦額葉來自許多嗅細胞的神經(jīng)纖維纏集在一起,形成線球狀的部分。在這里,纖維與多個次級神經(jīng)元——僧帽細胞的樹突相連接,進而由這里伸出神經(jīng)纖維形成嗅囊,終止于額葉下方。一般認為它在嗅味的辨別中具有重要的功能。對于大部份的脊椎動物而言,嗅球位在大腦的最前面,不過人的嗅球位于大腦的內(nèi)部。嗅球由篩骨的篩板固定且保護嗅球,哺乳動物的篩板會分隔嗅球和嗅上皮,而嗅神經(jīng)會穿過篩板中的篩孔而連接到嗅球。嗅球分為二個不同的結(jié)構(gòu):主嗅球及輔助嗅球。 5.方法簡介: 實驗室分離的小鼠嗅球神經(jīng)元細胞采用胰蛋白酶消化法、神經(jīng)元專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選結(jié)合化學試劑抑制法制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質(zhì)量檢測: 實驗室分離的小鼠嗅球神經(jīng)元細胞經(jīng)β-Tubulin免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。 7.培養(yǎng)信息: 包被條件PLL(0.1mg/ml) 培養(yǎng)基含B-27 Supplement、Penicillin、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號CM-M145 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細胞形態(tài)神經(jīng)元細胞樣 傳代特性屬于終末分化細胞;屬于不增殖細胞群 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相:空氣,95%;CO2,5% |
冷凍保存細胞之方法?
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將成1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
NGEF 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
PPP1R15A 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
PIAS3 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
GNL3 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
CDH19 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
S1PR1 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
ADH5 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
CTSG 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
CD58 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
GAP43 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
小鼠嗅球神經(jīng)元細胞0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Phosphatidylinositol 3, 4, 5-trisphosphate-dependent Rac exchanger 1 protein
李氏菌增菌肉湯(LB1) 英文名稱:Listeria Enrichment Broth Base 產(chǎn)品規(guī)格:9ml*20支/包
0.156-10 ng/mL 人骨骼肌肌動蛋白α1(ACTα1)ELISA試劑盒
MFC瓊脂平板(9cm) 英文名稱:MFC Agar 產(chǎn)品規(guī)格:10個/包
0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Interferon-induced, double-stranded RNA-activated protein kinase
0.312-20 ng/mL 人Mdm2結(jié)合蛋白ELISA試劑盒
復(fù)達欣 英文名稱:Fortum 產(chǎn)品規(guī)格:3mg/支*5
0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Glucosylceramidase
1.56-100 nmol/L ELISA Kit for Thyroxine
0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Peptidyl-prolyl cis-trans isomerase A