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詳細(xì)介紹
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過(guò)大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴(lài)氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱(chēng) | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
| 35.1（雜交瘤細(xì)胞抗CD2) | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X0645 |
商品介紹：
名稱(chēng) 35.1（雜交瘤細(xì)胞抗CD2) 種屬小鼠(B細(xì)胞)，小鼠（骨髓瘤細(xì)胞） 年齡（性別）不詳 組織來(lái)源未知 生長(zhǎng)特性懸浮細(xì)胞 細(xì)胞形態(tài)淋巴母細(xì)胞樣 背景描述動(dòng)物用佛波醇肉豆寇酸(PMA)活化的人T淋巴細(xì)胞免疫。 脾細(xì)胞與gp2/O-Agl4骨髓瘤細(xì)胞融合。 抗體與人T細(xì)胞表面蛋白Tp50(CD2)反應(yīng)。 抗體抑制T細(xì)胞增殖反應(yīng)和細(xì)胞毒反應(yīng)，但不抑制抗體倡導(dǎo)的細(xì)胞毒反應(yīng)。 生長(zhǎng)培養(yǎng)基RPMI-1640＋10% FBS＋1% P/S 推薦傳代比例3×10^5-5×10^5cells/mL 推薦換液頻率2~3次/周 凍存條件 凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 溫度：液氮 培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5% 注意事項(xiàng)該細(xì)胞為懸浮細(xì)胞，請(qǐng)注意離心收集細(xì)胞懸液；請(qǐng)勿直接倒掉細(xì)胞培養(yǎng)液。 |
冷凍保存細(xì)胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí)， 以防止冰晶過(guò)大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大??；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
TNFAIP3 基因全長(zhǎng)ORF克隆
MMP13 基因全長(zhǎng)ORF克隆
EFNA4 基因全長(zhǎng)ORF克隆
RGMA 基因全長(zhǎng)ORF克隆
NEDD9 轉(zhuǎn)錄變體1 基因全長(zhǎng)ORF克隆
CAT 基因全長(zhǎng)ORF克隆
BCL6 基因全長(zhǎng)ORF克隆
PTX3 基因全長(zhǎng)ORF克隆
PAH 基因全長(zhǎng)ORF克隆
PPARA 基因全長(zhǎng)ORF克隆
35.1（雜交瘤細(xì)胞抗CD2)0.156-10 ng/mL 人核苷二還原亞基M2(RIR2)ELISA試劑盒
78-5000 pg/mL 人周期蛋白依賴(lài)性激激活劑1 ELISA試劑盒
0.156-10 ng/mL 人受體應(yīng)答蛋白2(RARRES2)ELISA試劑盒
78-5000 pg/mL 人肌球蛋白調(diào)節(jié)輕多肽9(MYL9)ELISA試劑盒
1.56-100 ng/mL ELISA Kit for Human Serotransferrin
B用培養(yǎng)基 英文名稱(chēng)： 產(chǎn)品規(guī)格：250g
0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Keratin, type I cytoskeletal 13
0.47-30 nmol/L ELISA Kit for Human Lysyl oxidase homolog 3
孟加拉紅培養(yǎng)基顆粒 英文名稱(chēng)：Rose Bengal Medium 產(chǎn)品規(guī)格：300ml/袋*10
78-5000 pg/mL 人高親和力γ免疫球蛋白FC段受體I(IgG Fc receptor I)ELISA試劑盒
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