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詳細介紹
冷凍保存細胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
產品屬性：
產品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
| 小鼠肝枯否細胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X1099 |
商品介紹：
名稱 小鼠肝枯否細胞 2.組織來源：肝臟組織 3.產品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 4.細胞簡介： 小鼠枯否細胞分離自肝臟組織；肝臟是身體內以代謝功能為主的一個器官，并在身體里面起著去氧化、儲存肝糖、分泌性蛋白質的合成等作用；肝臟也消化系統中之膽汁。肝臟是機體內臟里最大的器官，位于機體中的腹部位置，在右側橫隔膜之下，位于膽囊之前端且于右邊腎臟的前方，胃的上方。肝臟是機體消化系統中最大的消化腺，為一紅棕色的V字形器官。肝臟是尿素合成的主要器官，又是新陳代謝的重要器官。肝臟在機體位置和形態(tài)結構：肝臟位于右上腹，隱藏在右側膈下和肋骨深面，大部分肝為肋弓所復蓋，僅在腹上區(qū)、右肋弓間露出并直接接觸腹前壁，肝上面則與膈及腹前壁相接?？莘袷霞毎?/span>(Kupffer細胞)是肝臟的肝血竇內一些固定于竇壁的巨噬細胞，它能吞噬和清除大部分從腸道來的抗原微粒，并能吞噬和清除肝血竇中的細菌、異物和衰老的紅細胞，并把血紅蛋白分解成膽紅素。此外，肝巨噬細胞也有處理抗原，誘導T細胞增殖，參與免疫調節(jié)的作用?？莘袷霞毎鸵话憔奘杉毎煌?，枯否氏細胞不具有增加抗原免疫原性的能力，相反有消除或減弱抗原性的作用。枯否氏細胞能吞噬來自血液循環(huán)的抗原抗體復合物和其他有害物質，以消除這些物質對機體的損害?？莘窦毎δ苷系K可導致腸源性內毒素血癥。電鏡下有很多皺褶和微絨毛。 5.方法簡介： 實驗室分離的小鼠肝枯否細胞采用混合酶灌流消化、低速離心、密度梯度離心、差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質量檢測： 實驗室分離的小鼠肝枯否細胞經CD68免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。 7.培養(yǎng)信息： 培養(yǎng)基含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等 產品貨號CM-M132 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細胞形態(tài)梭形、巨噬細胞 傳代特性屬于終末分化細胞；屬于不增殖細胞群 培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5% |
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質玻璃，并經過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
FGFR2 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽
ApoE 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
PLAU / UPA 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
AKT1 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
EphB2 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
EphB2 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽
SRC Kinase / Proto-oncogene c-Src 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
MMP-14 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
APP / PN2 轉錄變體2 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽
CD26 / DPP-IV 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽
小鼠肝枯否細胞0.156-10 ng/mL 人無翅型MMTV整合位點家族成員2B(WNT2B)ELISA試劑盒
沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基 英文名稱：Sabouraud’s Glucose Broth Medium 產品規(guī)格：250g
0.156-10 ng/mL 鹿特定基因序列(Deer)核酸檢測試劑盒
7.8-500 ng/mL ELISA Kit for Human Uncharacterized protein KIAA1377
PALCAM肉湯 英文名稱：PALCAM Broth 產品規(guī)格：250g
馬鈴薯葡萄糖瓊脂(PDA) 英文名稱：Potato Dextrose Agar 產品規(guī)格：250g
WLD培養(yǎng)基 英文名稱：WLD Medium 產品規(guī)格：250g
78-5000 pg/ml ELISA Kit for Human Stromelysin-2
0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human DNA replication factor Cdt1
0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Adipocyte plasma membrane-associated protein
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