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詳細(xì)介紹
冷凍保存細(xì)胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí)， 以防止冰晶過(guò)大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
| OKT 3 (小鼠雜交瘤細(xì)胞(抗CD3)) | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X0529 |
商品介紹：
名稱 OKT 3 (小鼠雜交瘤細(xì)胞(抗CD3)) 別稱OKT3 種屬小鼠(B細(xì)胞)，小鼠（骨髓瘤細(xì)胞） 年齡（性別）不詳 組織來(lái)源脾臟 生長(zhǎng)特性懸浮細(xì)胞 細(xì)胞形態(tài)淋巴母細(xì)胞樣 背景描述OKT 3細(xì)胞是一株用人外周血淋巴細(xì)胞免疫小鼠，然后取免疫小鼠的脾細(xì)胞與P3X63Ag8.U1骨髓瘤細(xì)胞融合而建株的細(xì)胞系。 生物安全等級(jí)1 生長(zhǎng)培養(yǎng)基IMDM＋20% FBS＋1% P/S 推薦傳代比例3×10^5-5×10^5cells/mL 推薦換液頻率2~3次/周 凍存條件 凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 溫度：液氮 培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5% 溫度：37℃ 注意事項(xiàng)該細(xì)胞為懸浮細(xì)胞，請(qǐng)注意離心收集細(xì)胞懸液；請(qǐng)勿直接倒掉細(xì)胞培養(yǎng)液。 |
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過(guò)大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大?。?/span>
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
PCDHA10 基因全長(zhǎng)ORF克隆
HS6ST2 基因全長(zhǎng)ORF克隆
CAPN2 基因全長(zhǎng)ORF克隆
GCDH 基因全長(zhǎng)ORF克隆
EEF1G 基因全長(zhǎng)ORF克隆
PLIN3 基因全長(zhǎng)ORF克隆
SDPR 基因全長(zhǎng)ORF克隆
SOX7 基因全長(zhǎng)ORF克隆
CTSW 基因全長(zhǎng)ORF克隆
M6PR 基因全長(zhǎng)ORF克隆
OKT 3 (小鼠雜交瘤細(xì)胞(抗CD3))PH7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液（2015藥典） Buffered Sodium Chloride – Peptone Solution 250g
20次 包涵體微量純化試劑盒 Inclusion Body Miniprep Kit 4℃保存（和核酸清除劑需要-20℃保存，包涵體溶解液室溫保存）
2 ug pSUOER-retro-neo pSUOER-retro-neo 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
50次 TRIzol伴侶 TRIzol-Mate 常溫
2 ug pCMV-Tag 2B pCMV-Tag 2B 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
動(dòng)力-硝酸鹽培養(yǎng)基（A法） Power - nitrate medium 250g
500g 亞鐵化鉀 ( 三水合 ) Potassium Ferrocyanide Trihydrate 室溫密封干燥保存
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