 |
上海谷研實(shí)業(yè)有限公司 |
|
—— 銷售熱線 ——
18321818584 |
| 參考價(jià) | 面議 |
更新時(shí)間：2022-04-02 14:31:14瀏覽次數(shù)：323
聯(lián)系我們時(shí)請(qǐng)說明是化工儀器網(wǎng)上看到的信息，謝謝!
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | GOY-01X0019 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工 |
| 主要用途 | 產(chǎn)品僅供科研使用 |
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
| AAV-293 (胚腎細(xì)胞) | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X0019 |
商品介紹：
名稱 AAV-293 (胚腎細(xì)胞) 別稱AAV293 種屬人類 年齡（性別）胎兒 組織來源腎；以腺病毒5DNA進(jìn)行轉(zhuǎn)化 生長特性貼壁細(xì)胞 細(xì)胞形態(tài)上皮細(xì)胞樣 背景描述AAV-293細(xì)胞源自普遍使用的293 [HEK-293]細(xì)胞株，但AAV-293細(xì)胞產(chǎn)生的病毒滴度更高。293 [HEK-293]細(xì)胞是剪切過的腺病毒5型DNA轉(zhuǎn)染的人胚腎細(xì)胞。跟293 [HEK-293]細(xì)胞一樣，AAV-293細(xì)胞反式表達(dá)腺病毒E1基因，當(dāng)共轉(zhuǎn)染三個(gè)AAV助質(zhì)粒(一個(gè)含ITR的質(zhì)粒、pAAV-RC和E1缺失助質(zhì)粒)時(shí)，AAV-293細(xì)胞可以產(chǎn)生有感染力的腺病毒-相關(guān)病毒顆粒；因此，我們推薦使用AAV-293細(xì)胞株繁殖腺病毒相關(guān)重組病毒。 生物安全等級(jí)2 生長培養(yǎng)基DMEM＋10% FBS＋1% P/S 推薦傳代比例1:3-1:4 推薦換液頻率2~3次/周 凍存條件 凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 溫度：液氮 培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5% 溫度：37℃ 注意事項(xiàng)該細(xì)胞貼壁松散，操作時(shí)請(qǐng)盡量輕柔；換液時(shí)需預(yù)熱培養(yǎng)基；收貨如有大塊脫落的細(xì)胞團(tuán)，為正?，F(xiàn)象，請(qǐng)按照收貨注意事項(xiàng)處理。 |
冷凍保存細(xì)胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
犬游離甲狀腺素(FT4)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝
庚型肝炎病毒(HGV)抗體(IgG)免疫試劑盒*直銷
Q熱科克斯體1(Q fever)抗體(IgG)免疫試劑盒*直銷
激肽釋放7(KLK 7)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
抗線粒體抗體(AMA)免疫試劑盒*直銷
白介素31(IL-31)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝
脂肪分化相關(guān)蛋白(ADRP)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝
兔血小板選擇素，P -選擇素免疫試劑盒進(jìn)口、組裝
高敏甲狀腺素(u-T4)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
氫化可的松(HYD)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝
AAV-293 (胚腎細(xì)胞) 10Ku 葡萄糖氧化 Glucose Oxidase -20℃保存
50T 流行性出血熱漢坦病毒PCR檢測試劑盒 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
0.1mg 山羊抗小鼠IgG，熒光素488標(biāo)記 Goat Anti-Mouse IgG ,IF488 Conjugate 4℃保存
2 ug pBIND pBIND 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
10mL TE緩沖液，PH8.5
2 ug pFastBac1 pFastBac1 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基（2015藥典） Sabouraud Dextrose Broth 250g
化工儀器網(wǎng)
化工儀器網(wǎng)