實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明:
1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕;
4.如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過(guò)大,以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率;
5.如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
產(chǎn)品屬性:
商品介紹:
名稱 大鼠三叉神經(jīng)元細(xì)胞 2.組織來(lái)源:三叉神經(jīng)組織 3.產(chǎn)品規(guī)格:5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 4.細(xì)胞簡(jiǎn)介: 大鼠三叉神經(jīng)元細(xì)胞分離自三叉神經(jīng)組織;三叉神經(jīng)為最粗大的混合性腦神經(jīng),含一般軀體感覺(jué)和特殊內(nèi)臟運(yùn)動(dòng)兩種纖維。其特殊內(nèi)臟運(yùn)動(dòng)纖維起于腦橋中段的三叉神經(jīng)運(yùn)動(dòng)核,纖維組成三叉神經(jīng)運(yùn)動(dòng)根,由腦橋基底部與腦橋臂交界處出腦,位于感覺(jué)根下內(nèi)側(cè),最后進(jìn)入三叉神經(jīng)第3支下頜神經(jīng)中,經(jīng)卵圓孔出顱,隨下頜神經(jīng)分支分布于咀嚼肌等。運(yùn)動(dòng)根內(nèi)還含有三叉神經(jīng)中腦核有關(guān)的纖維,主要傳導(dǎo)咀嚼肌的本體感覺(jué)。三叉神經(jīng)內(nèi)以軀體感覺(jué)神經(jīng)纖維為主,這些纖維的細(xì)胞體位于三叉神經(jīng)節(jié)(半月節(jié))內(nèi),該神經(jīng)節(jié)位于顱中窩顴骨巖部的前面三叉神經(jīng)壓跡處,為硬腦膜形成的美克爾腔包裹。三叉神經(jīng)節(jié)由假單極神經(jīng)元組成,其中樞突集中構(gòu)成了粗大的三叉神經(jīng)感覺(jué)根,由腦橋基底部與腦橋臂交界處入腦,止于三叉神經(jīng)諸感覺(jué)核,其中傳導(dǎo)痛溫覺(jué)的纖維主要終止于三叉神經(jīng)脊束核;傳導(dǎo)觸覺(jué)的纖維主要終止于三叉神經(jīng)腦橋核。三叉神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的周?chē)唤M成三叉神經(jīng)三大分支,即第1支眼神經(jīng)、第2支上頜神經(jīng)、第3支為下頜神經(jīng)。從3大分支不斷分支分布于面部皮膚、眼及眶內(nèi)、口腔、鼻腔、鼻旁竇的粘膜、牙、腦膜等,傳導(dǎo)痛、溫、觸等多種感覺(jué)。 5.方法簡(jiǎn)介: 實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠三叉神經(jīng)元細(xì)胞采用胰蛋白酶消化法結(jié)合神經(jīng)元專(zhuān)用培養(yǎng)基培養(yǎng)、化學(xué)試劑抑制法篩選制備而來(lái),細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質(zhì)量檢測(cè): 實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠三叉神經(jīng)元細(xì)胞經(jīng)β-Tubulin免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。 7.培養(yǎng)信息: 包被條件PLL(0.1mg/ml) 培養(yǎng)基含B-27 Supplement、Penicillin、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號(hào)CM-R314 換液頻率每2-3天換液一次 生長(zhǎng)特性貼壁 細(xì)胞形態(tài)神經(jīng)元細(xì)胞樣 傳代特性屬于終末分化細(xì)胞;屬于不增殖細(xì)胞群 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相:空氣,95%;CO2,5% |
冷凍保存細(xì)胞之方法?
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(shí)(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí), 以防止冰晶過(guò)大,造成細(xì)胞大量死亡,亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將成1mm3左右大?。?/span>
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
小鼠 IL12A & IL12B Heterodimer 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
小鼠 IL12A & IL12B Heterodimer 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
小鼠 IFNA13 / Interferon alpha-13 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
小鼠 IFNA4 / Interferon alpha-4 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
小鼠 IFNA14 / Interferon alpha-14 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
乙型流感 (B/Brisbane/60/2008) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
小鼠 IL1R1 / CD121a 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
甲型流感 H3N2 (A/Babol/36/2005) 神經(jīng) (Neuraminidase/NA) 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
小鼠 OSMR / IL-31RB 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
ULBP2 / N2DL-2 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
大鼠三叉神經(jīng)元細(xì)胞聯(lián)氨 CP,98.0%氯化 分析標(biāo)準(zhǔn)品,99.98%M30(Mouse Embryonic Stem MESPU30) ELISA Kit 小鼠胚胎干系MESPU30
聯(lián)氨 99.99% metals basis氯化 分析標(biāo)準(zhǔn)品,K(99.97%)/Cl(100.00%)NF-κB p65(Mouse nuclear factor-κB p65) ELISA Kit 小鼠核因子κB亞基p65親和肽
鹽酸 ACS, 37% fuming, Hg ≤0.0000005%, ≥37% (T)重鉻酸 分析標(biāo)準(zhǔn)品,99.998%GP- II b III a/CD41+CD61(Mouse plaet membrane glycoprotein II b III a) ELISA Kit 小鼠血小板膜糖蛋白ⅡbⅢa
鹽酸 GR,36-38%重鉻酸標(biāo)準(zhǔn)溶液0.1mol/LFFA(Mouse free fatty acids) ELISA Kit 小鼠游離脂肪酸
鹽酸 用于痕量分析, ≥37% (T)鄰苯二甲酸氫 核磁共振定量標(biāo)準(zhǔn),99.998%TSP-1(Mouse thrombospondin 1) ELISA Kit 小鼠血小板反應(yīng)蛋白/敏感蛋白1
鹽酸 ACS, 37%高錳酸標(biāo)準(zhǔn)溶液1/5KMnO4:0.1011mol/LON(Mouse osteonectin) ELISA Kit 小鼠骨粘連蛋白
鹽酸 電子級(jí),37%標(biāo)準(zhǔn)溶液 1.00mg/mL,基體:甲(劇品)FA(Mouse Folic acid) ELISA Kit 小鼠
鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液 1.000mol/L(1N)環(huán)唑標(biāo)準(zhǔn)溶液 1.00mg/mlhiston-H2b(Mouse histon-H2b) ELISA Kit 小鼠組蛋白H2bx