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上海谷研實(shí)業(yè)有限公司 |
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| 參考價(jià) | 面議 |
更新時(shí)間：2022-04-18 14:37:56瀏覽次數(shù)：266
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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 |
|---|---|---|---|
| 貨號 | GOY-01X0841 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工 |
| 主要用途 | 產(chǎn)品僅供科研使用 |
冷凍保存細(xì)胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
| 小鼠肝竇內(nèi)皮細(xì)胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X0841 |
商品介紹：
名稱 小鼠肝竇內(nèi)皮細(xì)胞 2.組織來源：肝臟組織 3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 4.細(xì)胞簡介： 小鼠肝竇內(nèi)皮細(xì)胞細(xì)胞分離自肝臟組織；肝臟是身體內(nèi)以代謝功能為主的一個器官，并在身體里面起著去氧化、儲存肝糖、分泌性蛋白質(zhì)的合成等作用；肝臟也消化系統(tǒng)中之膽汁。肝臟是機(jī)體內(nèi)臟里最大的器官，位于機(jī)體中的腹部位置，在右側(cè)橫隔膜之下，位于膽囊之前端且于右邊腎臟的前方，胃的上方。肝臟是機(jī)體消化系統(tǒng)中最大的消化腺，為一紅棕色的V字形器官。肝臟是尿素合成的主要器官，又是新陳代謝的重要器官。肝臟在機(jī)體位置和形態(tài)結(jié)構(gòu)：肝臟位于右上腹，隱藏在右側(cè)膈下和肋骨深面，大部分肝為肋弓所復(fù)蓋，僅在腹上區(qū)、右肋弓間露出并直接接觸腹前壁，肝上面則與膈及腹前壁相接。肝竇內(nèi)皮細(xì)胞（SEC）是肝臟內(nèi)所占比例最高的非實(shí)質(zhì)細(xì)胞，位于肝竇腔與肝細(xì)胞之間，具有物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)、吞噬、抗原提呈、免疫耐受等功能。SEC由于擁有一般細(xì)胞所沒有的窗孔結(jié)構(gòu)、細(xì)胞間連結(jié)松散、內(nèi)皮下缺少基底膜而使其具有高度通透性，從而達(dá)到快速交換各種大小分子的目的。肝在遭到多種病原侵襲時(shí)，肝竇內(nèi)皮細(xì)胞窗孔逐漸減少或消失，內(nèi)皮下基膜形成，產(chǎn)生類似于連續(xù)型毛細(xì)血管的結(jié)構(gòu)，這一過程稱為肝竇毛細(xì)血管化。它由多種因素引起，其過程極復(fù)雜，在多種肝病的發(fā)病前期階段均有出現(xiàn)，近年來受到廣泛關(guān)注。 5.方法簡介： 實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠肝竇內(nèi)皮細(xì)胞采用混合酶灌流消化、反復(fù)低速離心、密度梯度離心法，并通過內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質(zhì)量檢測： 實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠肝竇內(nèi)皮細(xì)胞經(jīng)CD31、CD14免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。 7.培養(yǎng)信息： 包被條件PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%） 培養(yǎng)基含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號CM-M040 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細(xì)胞形態(tài)內(nèi)皮細(xì)胞樣 傳代特性可傳1-2代 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5% |
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
小鼠 STYK1 / NOK 基因全長ORF克隆
小鼠 CCR8 基因全長ORF克隆
小鼠 PRPF4B 基因全長ORF克隆
小鼠 NEK3 基因全長ORF克隆
小鼠 TSPAN7 基因全長ORF克隆
小鼠 PRNP 基因全長ORF克隆
小鼠 MUC1 基因全長ORF克隆
小鼠 IFITM1 基因全長ORF克隆
小鼠 GGT1 基因全長ORF克隆
小鼠 PROCR 基因全長ORF克隆
小鼠肝竇內(nèi)皮細(xì)胞78-5000 pg/mL 人線粒體腎型谷氨酰胺(GLS)ELISA試劑盒
包姜氏瓊脂培養(yǎng)基 英文名稱：Bordet-Gengou Agar Medium 產(chǎn)品規(guī)格：250g
TPY瓊脂培養(yǎng)基 英文名稱：TPY Agar Medium 產(chǎn)品規(guī)格：250g
0.156-10 ng/mL 人O6甲基DNA甲基轉(zhuǎn)移(MGMT)ELISA試劑盒
MUG快速鑒定大腸試劑 英文名稱： 產(chǎn)品規(guī)格：5ml*10支/盒
4.69-300 U/L ELISA Kit for Human Pancreatic triacylglycerol lipase
0.625-40 ng/mL ELISA Kit for Human C-telopeptide of Collagen alpha-1(I) chain
15.6-1000 pg/ml ELISA Kit for Human AT-rich interactive domain-containing protein 4B
12.5-800 U/mL ELISA Kit for Human Aryl hydrocarbon receptor
6.25-400 ng/mL 人K依賴蛋白S(VKDPs)ELISA試劑盒
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