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詳細(xì)介紹
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
| SW948 (結(jié)腸腺癌細(xì)胞) | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X0615 |
商品介紹：
名稱 SW948 (結(jié)腸腺癌細(xì)胞) 別稱SW-948; SW 948 種屬人類 年齡（性別）女性，81歲 組織來源結(jié)腸 生長特性貼壁細(xì)胞 細(xì)胞形態(tài)上皮細(xì)胞樣 背景描述Established from the colon tumor of a 81-year-old Caucasian woman with colon adenocarcinoma (Duke C) 生物安全等級1 生長培養(yǎng)基Leibovitz's L-15＋10% FBS＋1%P/S 推薦傳代比例1:2-1:5 推薦換液頻率2~3次/周 倍增時間~120小時,(PubMed=1000501); 2-4天 (DSMZ) 凍存條件 凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 溫度：液氮 培養(yǎng)條件 氣相：空氣，100% 溫度：37℃ 致瘤性Yes, in nude mice Tumors developed within 21 days at 100% frequency (5/5) in nude mice inoculated subcutaneously with 107 cells. 基因表達(dá)情況carcinoembryonic antigen (CEA) 7 ng/106 cells/10 days; colon specific antigen (CSAp) 750 units in 0.5 mL cell sonicate; keratin 注意事項1、該細(xì)胞推薦使用Leibovitz's L-15培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，Leibovitz's L-15不可以通入二氧化碳，會產(chǎn)生細(xì)胞毒性； 2、如您沒有無二氧化碳的培養(yǎng)箱，可使用DMEM替代Leibovitz's L-15，使用DMEM培養(yǎng)基時即可正常通入5%二氧化碳； 2、配套專用培養(yǎng)基默認(rèn)Leibovitz's L-15配置，如需DMEM配方，請聯(lián)系銷售下單備注更改。 |
冷凍保存細(xì)胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
實(shí)驗(yàn)報告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
PDK2 基因全長ORF克隆
ADRBK2 基因全長ORF克隆
PKD1L2 基因全長ORF克隆
MICA 基因全長ORF克隆
CHST4 基因全長ORF克隆
FUT9 基因全長ORF克隆
BDKRB1 基因全長ORF克隆
PRKACG 基因全長ORF克隆
ISL1 基因全長ORF克隆
ANGPTL7 基因全長ORF克隆
SW948 (結(jié)腸腺癌細(xì)胞) 細(xì)菌總數(shù)顯色培養(yǎng)基（不含瓊脂） 英文名稱： 產(chǎn)品規(guī)格：250g
0.78-50 ng/mL ELISA Kit for Human Signal transducer and activator of transcription 5A
15.6-1000 ng/mL ELISA Kit for Human Interferon alpha-10
0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Ezrin
0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Dipeptidyl peptidase 4
YM培養(yǎng)基 英文名稱：YM Medium 產(chǎn)品規(guī)格：250g
7.8-500 pg/mL 人肥大細(xì)胞羧肽3(CPA3)ELISA試劑盒
0.156-10 ng/mL 人肌營養(yǎng)不良蛋白(Dystrophin)ELISA試劑盒
0.312-20 ng/mL 人帕金協(xié)同調(diào)節(jié)基因蛋白ELISA試劑盒
抗生素5號 英文名稱：Antibiotic NO.5 產(chǎn)品規(guī)格：250g
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