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詳細(xì)介紹
冷凍保存細(xì)胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí)， 以防止冰晶過(guò)大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
| 小鼠腸神經(jīng)嵴干細(xì)胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X1317 |
商品介紹：
名稱 小鼠腸神經(jīng)嵴干細(xì)胞 2.組織來(lái)源：腸組織 3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 4.細(xì)胞簡(jiǎn)介： 小鼠腸神經(jīng)嵴干細(xì)胞分離腸組織；神經(jīng)嵴干細(xì)胞（neural crest stem cells，NCSC），即外周神經(jīng)系統(tǒng)干細(xì)胞，起源于胚胎期的神經(jīng)管背側(cè)，與中樞神經(jīng)系統(tǒng)干細(xì)胞在形態(tài)學(xué)上有著顯著不同，NCSC可表達(dá)低親和力神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子受體p75NTR而不能分化出少突膠質(zhì)細(xì)胞，而中樞神經(jīng)系統(tǒng)干細(xì)胞與之恰好相反。NCSC可在不同部位分化出多種組織，如神經(jīng)元、神經(jīng)膠質(zhì)、黑色素細(xì)胞、內(nèi)分泌細(xì)胞、平滑肌、骨骼肌及骨等，其中可特異性分化出腸神經(jīng)系統(tǒng)中神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)的NCSC，被稱為腸神經(jīng)嵴干細(xì)胞（gut neural crest stem cells，GNCSC）。 5.方法簡(jiǎn)介： 實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠腸神經(jīng)嵴干細(xì)胞采用中性蛋白酶-膠原酶聯(lián)合消化法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質(zhì)量檢測(cè)： 實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠腸神經(jīng)嵴干細(xì)胞經(jīng)Nestin免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。 7.培養(yǎng)信息： 培養(yǎng)基含B-27 Supplement、EGF、bFGF、Penicillin、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號(hào)CM-M216 換液頻率每2-3天換液一次 生長(zhǎng)特性懸浮 細(xì)胞形態(tài)球形 傳代特性可傳2-3代 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5% |
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過(guò)大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大??；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
PLAC9 / Placenta-specific 9 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
PLBD2 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
GPHA2 / Glycoprotein hormone alpha 2 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
小鼠 NKG2A / NKG2 / CD159A / KLRC1 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
食蟹猴 ART4 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
食蟹猴 IL2RA 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
食蟹猴 CD160 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
狗 CD137 / 4-1BB / TNFRSF9 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
狗 IL13RA2 / IL13R 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
狗 CXCL16 / SR-PSOX 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
小鼠腸神經(jīng)嵴干細(xì)胞mRNA結(jié)合蛋白抗體Anti-Connexin-46(GJA3) Antibody對(duì)蝦桿狀病PCR檢測(cè)試劑盒多少錢
環(huán)指蛋白126抗體Anti-COPE Antibody副豬嗜血桿定量PCR檢測(cè)試劑盒規(guī)格
小鼠抗人紅單克隆抗體Anti-COX8A Antibody鉤端螺旋體PCR檢測(cè)試劑盒品牌
受體應(yīng)答蛋白2抗體Anti-COPS5 Antibody口蹄疫病O亞型PCR檢測(cè)試劑盒品牌
抗Rap1A抗體Anti-COPS5 Antibody(原貨號(hào)PB0521)馬鈴薯Cry3c基因PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書
RAS癌基因相關(guān)蛋白R(shí)AB7抗體Anti-CPA1 Antibody大豆RRPCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書
c-Myc應(yīng)答蛋白抗體Anti-CP Antibody(原貨號(hào)PB0896)單增李斯特PCR檢測(cè)試劑盒多少錢
RAS癌基因相關(guān)蛋白R(shí)AB6B抗體Anti-CPAMD8 Antibody解脲支原體PCR檢測(cè)試劑盒多少錢
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