化工儀器網(wǎng)
詳細(xì)介紹
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
| 肺小動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X1363 |
商品介紹：
名稱 肺小動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞 2.組織來源：肺小動(dòng)脈組織 3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 4.細(xì)胞簡(jiǎn)介： 人肺小動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞分離自肺小動(dòng)脈組織；小動(dòng)脈（smallartery），管徑在0.3～1mm之間，小動(dòng)脈包括粗細(xì)不等的幾級(jí)分支，也屬肌性動(dòng)脈。較大的小動(dòng)脈，內(nèi)膜有明顯的內(nèi)彈性膜，中膜有幾層平滑肌，外膜厚度與中膜相近，一般沒有外彈性膜。小動(dòng)脈是決定周圍循環(huán)阻力大小的主要因素，也是調(diào)節(jié)微循環(huán)灌注量的“總開關(guān)"。典型的小動(dòng)脈，其管壁的厚度與管徑相比約為1∶2。中膜的肌層相對(duì)比其他動(dòng)脈為厚，當(dāng)平滑肌在神經(jīng)支配下強(qiáng)力收縮時(shí)，其管腔可以*閉塞，而使血液不能流入它所分布的毛細(xì)血管內(nèi)，從而增加了周圍血液循環(huán)的阻力。如果有許多小動(dòng)脈同時(shí)收縮，可使血壓顯著上升。反之，當(dāng)小動(dòng)脈的平滑肌舒張時(shí)，則可使大量的血液流入毛細(xì)血管，外周阻力明顯下降，血壓降低。終末小動(dòng)脈（terminal arteri-ole）的口徑為20～30μm；后小動(dòng)脈（metar-teriole），又稱毛細(xì)血管前小動(dòng)脈（precapil-lary arteriole）的口徑為12～15μm。管壁內(nèi)均有較稀疏的平滑肌，在毛細(xì)血管前小動(dòng)脈分支的起始部分，管壁平滑肌成分增厚，叫做毛細(xì)血管前括約肌（precapillary sphinc-ter），其收縮或舒張，可調(diào)節(jié)真毛細(xì)血管的血流量，是調(diào)節(jié)微循環(huán)灌注量的“分開關(guān)"。 5.方法簡(jiǎn)介： 實(shí)驗(yàn)室分離的人肺小動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞采用中性蛋白酶-膠原酶聯(lián)合消化法制備而來制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質(zhì)量檢測(cè)： 實(shí)驗(yàn)室分離的人肺小動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。 7.培養(yǎng)信息： 培養(yǎng)基含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號(hào)CM-H236 換液頻率每2-3天換液一次； 生長(zhǎng)特性貼壁 細(xì)胞形態(tài)成纖維細(xì)胞樣 傳代特性可傳3-5代左右 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5% |
冷凍保存細(xì)胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大??；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
大鼠 Syndecan-1 / SDC1 / CD138 細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)
大鼠 CD83 細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)
大鼠 CD79B / B29 細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)
大鼠 KIT / c-KIT 細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)
大鼠 Contactin 3 / CNTN3 細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)
大鼠 REG3A 細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)
大鼠 REG3A 細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)
大鼠 REG4 細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)
大鼠 IFNA5 / IFNaG 細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)
大鼠 CD70 / CD27L / TNFSF7 細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)
肺小動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞緊密連接蛋白12抗體Human CES5A(Carboxylesterase 5A) ELISA Kit人尿激（UK）ELISA試劑盒,
CHIC2蛋白抗體Human PARM1(Prostate androgen-regulated mucin-like protein 1) ELISA Kit人心肌營養(yǎng)素1（CT-1）ELISA試劑盒,
化周期檢測(cè)點(diǎn)激1抗體Human LETMD1(LETM1 domain-containing protein 1) ELISA Kit人血管生成素受體/含球蛋白樣環(huán)和上皮生長(zhǎng)因子樣域激1（Tie1）ELISA試劑盒,
化周期檢測(cè)點(diǎn)激2抗體Human FAF2(FAS-associated factor 2) ELISA Kit人類似cDNA順序BC027382 ELISA試劑盒,
化周期檢測(cè)點(diǎn)激2抗體Human SPINK7(Serine protease inhibitor Kazal-type 7) ELISA Kit人特異性巨噬武裝因子（SMAF）ELISA試劑盒,
化周期檢測(cè)點(diǎn)激2抗體Human MTX3(Metaxin-3) ELISA Kit人未化類胰島素生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白-1ELISA試劑盒,
化周期檢測(cè)點(diǎn)激2抗體Human FAM151A(Protein FAM151A) ELISA Kit小鼠可溶性血管內(nèi)皮蛋白C受體（sEPCR）ELISA試劑盒,
遺傳性脈絡(luò)膜缺乏癥相關(guān)蛋白抗體Human MTPAP(Poly(A) RNA polymerase, mitochondrial) ELISA Kit兔尿激型纖溶原激活物（uPA）ELISA試劑盒,
化工儀器網(wǎng)