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詳細介紹
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
| K7M2 wt [K7M2-WT] (小鼠骨肉瘤成骨細胞) | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X0369 |
商品介紹：
名稱 K7M2 wt [K7M2-WT] (小鼠骨肉瘤成骨細胞) 別稱K7M2 wt; K7M2 種屬小鼠 年齡（性別）成年 組織來源品系：BALB/c；器官：骨；疾?。汗侨饬?；來源轉移灶：肺；細胞類型：成骨細胞 生長特性貼壁細胞 細胞形態(tài)成骨細胞樣 背景描述K7M2 wt [K7M2-WT]細胞抗原表達：Ⅷ因子、整合唾液酸蛋白(BSP)、二聚糖、飾膠蛋白聚糖、絨毛蛋白。此外，骨唾液酸蛋白、二聚糖、飾膠蛋白聚糖和骨調素的表達顯示K7M2 wt [K7M2-WT]細胞骨家族細胞特性。 生物安全等級1 生長培養(yǎng)基DMEM＋10% FBS＋1% P/S 推薦傳代比例1:3-1:4 推薦換液頻率2~3次/周 倍增時間~31小時 凍存條件 凍存液：55% 基礎培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 溫度：液氮 培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5% 溫度：37℃ 致瘤性Yes, forms tumors in BALB/c mice with spontaneous metastasis to the lungs in over 90% of mice inoculated. 抗原表達情況CD31+ 基因表達情況secreted phosphoprotein 1 (osteopontin); factor VIII |
冷凍保存細胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
SIM2 基因全長ORF克隆
TTYH2 基因全長ORF克隆
GABRB2 基因全長ORF克隆
USH1G 基因全長ORF克隆
THRB 基因全長ORF克隆
PSMC3 基因全長ORF克隆
MMAA 基因全長ORF克隆
TMPRSS11A 基因全長ORF克隆
CHRFAM7A 基因全長ORF克隆
TUBAL3 基因全長ORF克隆
K7M2 wt [K7M2-WT] (小鼠骨肉瘤成骨細胞)含225ml LB1肉湯均質袋 LB1 Broth 10個/包
500U Benzonase核酸 Benzonase Nuclease -20℃保存
500mL Potassium Phosphate Solution，0.2M, pH7.4. Potassium Phosphate Solution，0.2M, pH7.4. 常溫保存
5mL 新生溶液,50mg/mL Novobiocin Sodium Solution -20℃避光保存
2 ug pP-αSUMO3 pP-αSUMO3 低溫運輸，-20℃保存
葡萄糖銨 20支
2 ug pCaspase3-sensor pCaspase3-sensor 低溫運輸，-20℃保存
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