賴氨酸(LYS)測試盒可見分光光度法

賴氨酸(LYS)測試盒可見分光光度法公司正在出售的產(chǎn)品：布魯氏桿菌屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒豬布魯氏桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒水牛正痘病毒探針法熒光定量PCR試劑盒牛仰口線蟲探針法熒光定量PCR試劑盒羊仰口線蟲探針法熒光定量PCR試劑盒洋蔥伯克氏菌探針法熒光定量PCR試劑盒鼻疽伯克霍爾德氏菌探針法熒光定量PCR試劑盒類鼻疽伯克霍爾德菌探針法熒光定量PCR試劑盒伯克氏菌通用探針法熒光定量P

賴氨酸(LYS)測試盒可見分光光度法

本公司所有產(chǎn)品僅供科學(xué)實(shí)驗(yàn)，不做其他科學(xué)實(shí)驗(yàn)外的使用！
商品屬性：

測定意義：

賴氨酸是人體必需氨基酸之一，能促進(jìn)人體發(fā)育、增強(qiáng)免疫功能，并有提高中樞神經(jīng)組織功能的作用。賴氨酸為堿性必需氨基酸。由于谷物食品中的賴氨酸含量甚低，且在加工過程中易被破壞而缺乏，故稱為第一限制性氨基酸。

測定原理：

蛋白質(zhì)中的賴氨酸具有一個游離的ε-NH2，它與茚三酮試劑反應(yīng)生成藍(lán)紫色物質(zhì)，其顏色的深淺在一定范圍內(nèi)與賴氨酸的含量成線性關(guān)系。氨酸與賴氨酸的碳原子數(shù)目相同，而且僅有—個游離氨基(ε-NH2)，所以通常用氨酸配制標(biāo)準(zhǔn)液。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰、蒸餾水、水浴鍋。

試劑的組成和配制:

提取液一：液體 100mL×1 瓶，4℃保存。

提取液二：液體 100mL×1 瓶，4℃保存。

試劑一：粉劑×1 瓶，-20℃保存；

試劑二：液體 20mL×1 瓶，4℃保存；

試劑三：液體 14uL×1 支，4℃保存；

組織樣本的前處

①總 GAPDH 酶提?。航ㄗh稱取約 0.1g 樣本，加入 1mL 提取液一，冰浴勻漿后超聲破碎（冰浴，200W，破碎 3s，間歇 7s，總時間 1min），然后 4℃，8000g 離心 10min，取上清測定。

②胞漿和葉綠體 GAPDH 酶的分離：按照植物組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5～10的比例（建議稱取約 0.1g 樣本，加入 1mL 提取液一），冰浴勻漿后于 4℃，200g 離心 5min，棄沉淀，取上清4℃，8000g 離心 10min，取上清用于測定胞漿 GAPDH 酶活性，取沉淀加 1mL 提取液二，震蕩溶解后超聲破碎（冰浴，200W，破碎 3s，間歇 7s，總時間 1min），然后 4℃，8000g 離心 10min，取清測定葉綠體中 GAPDH 酶活性。建議測定總 GAPDH 酶活性，按照步驟①提取粗酶液，若需要分別測定胞漿和葉綠體中的GAPDH，則按照步驟②提取粗酶液。細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞的前處理先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個）：提取液一體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液一），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

測定步驟:

1、 分光光度計或酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 340nm，蒸餾水調(diào)零。

2、 樣本測定

（1）工作液的配制：將試劑二全部倒入試劑一瓶中，充分溶解，37℃(哺乳動物)或 25℃(其它物種)預(yù)熱 10 分鐘；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。

（2）在試劑三中加入 500μL 蒸餾水，充分混勻待用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。

（3）在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 5μL 樣本、5μL 試劑三和 190μL 工作液，混勻，加入最后一個試劑的同時開始計時，記錄 340nm 處 20s 時的吸光值 A1 和 5min20s 后的吸光值 A2，計算 ΔA=A1-A2。

GAPDH 活性計算

a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下

（1）按樣本蛋白濃度計算

單位的定義：每 mg 組織蛋白每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個酶活力單位。GAPDH（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(V 樣×Cpr) ÷T=1286×ΔA÷Cpr

（2）按樣本鮮重計算

單位的定義：每 g 組織每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個酶活力單位。GAPDH（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(W ×V 樣÷V 樣總) ÷T=1286×ΔA÷W

（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計算

單位的定義：每一萬個細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個酶活力單位。GAPDH（nmol/min/104cell）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(500 ×V 樣÷V 樣總) ÷T=2.572×ΔA

V 反總：反應(yīng)體系總體積，2×10-4L；ε：NADH 摩爾消光系數(shù)，6.22×103L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V 樣：加入樣本體積，0.005 mL；V 樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應(yīng)時間，5 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500 萬。

b.用 96 孔板測定的計算公式如下

（1）按樣本蛋白濃度計算

單位的定義：每 mg 組織蛋白每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個酶活力單位。GAPDH（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(V 樣×Cpr) ÷T=2572×ΔA÷Cpr

（2）按樣本鮮重計算

單位的定義：每 g 組織每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個酶活力單位。GAPDH（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(W ×V 樣÷V 樣總) ÷T=2572×ΔA÷W

（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計算

單位的定義：每一萬個細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個酶活力單位。GAPDH（nmol/min/104cell）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(500 ×V 樣÷V 樣總) ÷T=5.144×ΔA

V 反總：反應(yīng)體系總體積，2×10-4L；ε：NADH 摩爾消光系數(shù)，6.22×103L / mol /cm；d：96 孔板光徑，0.5cm；V 樣：加入樣本體積，0.005 mL；V 樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應(yīng)時間，5 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500 萬。

生化試劑盒的使用注意事項(xiàng)：

選擇合適的試劑盒：根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮蜋z測對象選擇合適的試劑盒，確保實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性和可靠性。

嚴(yán)格遵循說明書：按照試劑盒的說明書進(jìn)行操作，避免誤用或浪費(fèi)。

注意保存條件：按照試劑盒的保存條件進(jìn)行妥善保存，避免陽光直射、高溫或潮濕等不利因素。

控制實(shí)驗(yàn)條件：在實(shí)驗(yàn)過程中嚴(yán)格控制實(shí)驗(yàn)條件，如溫度、時間、pH值等，以確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的穩(wěn)定性。

公司正在出售的產(chǎn)品：

訂購流程:

1、訂購前,請與銷售員核對產(chǎn)品中文名稱/CAS號/英文名稱等。

2、我司大部分產(chǎn)品都是現(xiàn)貨,產(chǎn)品核實(shí)好下單后即可當(dāng)天發(fā)貨。(庫存信息以當(dāng)日為準(zhǔn))如有特殊要求請在發(fā)貨前與銷售員聯(lián)系。

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