詳細介紹
反應五要素:
癢螨通用PCR檢測試劑盒品牌參加PCR反應的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應的關鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數(shù)第二個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。
使用及效果:
將壓碎的一小片重量約在100 mg 左右的植物種子(約1/4 黃豆大?。┗蛑睆郊s為0.5-0.7 cm(或面積相當?shù)钠渌螤睿┑闹参锶~片直接加到新鮮配制的0.1 mL溶液A 中,95℃保溫10-15 分鐘,加入0.1 mL 溶液B,混勻,直接取上清液(相當于PCR 體積的1/10)作為模板進行PCR。剩余樣品可以放4℃保存。
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 分類 |
癢螨通用PCR檢測試劑盒品牌 | 50T | PCR檢測試劑盒 |
樣本采集、存放及運輸:
1、樣本采集:各類型樣本按照常規(guī)方法采集;
2、存放:樣本在2~8℃條件下保存應不超過72h,-70℃以下可長期保存,但應避免反復凍融(zui多凍融3次);
3、運輸:采用泡沫箱加冰密封進行運輸。
普通PCR反應流程:
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自備物品:
癢螨通用PCR檢測試劑盒品牌15毫升錐形離心管:用于制備樣品的容器
比色皿:用于比色的容器
96孔酶標板:用于比色的容器
分光光度儀:用于比色分析
酶標儀:用于微量樣品比色分析
儲存條件:
14℃或-20℃
準備物品
清理液(A) 毫升
染色液(t B) 微升
稀釋液(C) 毫升
溶解液(tD) 毫升
產(chǎn)品說明書 1份
蛋白胨/PeptoneBR250克國產(chǎn)/進口
鏈霉素-青霉素(100X)規(guī)格:100ml
亮綠糖培養(yǎng)基/Brilliant Green Lactose Medium飲用天然礦泉水中大腸桿菌檢驗250克國產(chǎn)/進口
大鼠腮腺細胞*培養(yǎng)基100mL
色氨酸肉湯發(fā)酵管BR20支國產(chǎn)/進口
U-2 OS(人骨肉瘤細胞)5×106cells/瓶×2
游離生物素測定培養(yǎng)基/Free Biotin Assay Medium嬰兒食品和粉中游離生物素測定250克國產(chǎn)/進口
RKO-AS45-1(人結(jié)腸轉(zhuǎn)基因細胞)5×106cells/瓶×2
小鼠關節(jié)軟骨細胞*培養(yǎng)基100mL
號瓊脂基礎/號瓊脂/NO.4 Agar Base霍亂弧菌選擇性分離培養(yǎng)250克國產(chǎn)/進口
HA(人羊膜細胞)5×106cells/瓶×2
癢螨通用PCR檢測試劑盒品牌鹽酸羅卡因 英文名稱 HPLC法含量測定 規(guī)格: 20mg/支進口/國產(chǎn) 含量:
草烏甲素 英文名稱 規(guī)格: 20mg/支進口/國產(chǎn) 含量: Bulleyaconitine A
可溶性淀粉 英文名稱 效價測定 規(guī)格: 20mg/支進口/國產(chǎn) 含量:
辣椒堿 英文名稱 Capsaicin 規(guī)格: 20mg/支進口/國產(chǎn) 含量: ≥98%
草烏甲素 英文名稱 對照品 規(guī)格: 20mg/支進口/國產(chǎn) 含量: 含量測定(HPLC)
苦木 英文名稱 中藥對照藥材 規(guī)格: 20mg/支進口/國產(chǎn) 含量: TLC法鑒別
赤霉素 標準品 CAS號:28281 100mg 英文名稱 規(guī)格: 20mg/支進口/國產(chǎn) 含量:
雙環(huán)醇 英文名稱 含量測定 規(guī)格: 20mg/支進口/國產(chǎn) 含量:
馬兜鈴內(nèi)酰胺 英文名稱 aristololactam 規(guī)格: 20mg/支進口/國產(chǎn) 含量: ≥98%
葛根素 英文名稱 葛根黃酮 規(guī)格: 20mg/支進口/國產(chǎn) 含量: Puerarin
匹多莫德 英文名稱 對照品 規(guī)格: 20mg/支進口/國產(chǎn) 含量: 含量測定(HPLC)