詳細(xì)介紹
反應(yīng)五要素:
蛤弧菌PCR檢測(cè)試劑盒品牌參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長(zhǎng)度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過(guò)多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數(shù)第二個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì),以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列有適宜的酶切位點(diǎn), 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無(wú)明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。
使用及效果:
將壓碎的一小片重量約在100 mg 左右的植物種子(約1/4 黃豆大?。┗蛑睆郊s為0.5-0.7 cm(或面積相當(dāng)?shù)钠渌螤睿┑闹参锶~片直接加到新鮮配制的0.1 mL溶液A 中,95℃保溫10-15 分鐘,加入0.1 mL 溶液B,混勻,直接取上清液(相當(dāng)于PCR 體積的1/10)作為模板進(jìn)行PCR。剩余樣品可以放4℃保存。
產(chǎn)品名稱(chēng) | 規(guī)格 | 分類(lèi) |
蛤弧菌PCR檢測(cè)試劑盒品牌 | 50T | PCR檢測(cè)試劑盒 |
樣本采集、存放及運(yùn)輸:
1、樣本采集:各類(lèi)型樣本按照常規(guī)方法采集;
2、存放:樣本在2~8℃條件下保存應(yīng)不超過(guò)72h,-70℃以下可長(zhǎng)期保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融(zui多凍融3次);
3、運(yùn)輸:采用泡沫箱加冰密封進(jìn)行運(yùn)輸。
普通PCR反應(yīng)流程:
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自備物品:
蛤弧菌PCR檢測(cè)試劑盒品牌15毫升錐形離心管:用于制備樣品的容器
比色皿:用于比色的容器
96孔酶標(biāo)板:用于比色的容器
分光光度儀:用于比色分析
酶標(biāo)儀:用于微量樣品比色分析
儲(chǔ)存條件:
14℃或-20℃
準(zhǔn)備物品
清理液(A) 毫升
染色液(t B) 微升
稀釋液(C) 毫升
溶解液(tD) 毫升
產(chǎn)品說(shuō)明書(shū) 1份
溴磷松英文名稱(chēng):Bromine and phosphorusCAS號(hào):2104-96-3分子式:366分子量:C8H8BrCl2O3PS
4-甲酰咪唑分子式:96.09分子量: C4H4N2O英文名稱(chēng):4- aCAS號(hào):3034-50-2
正丁分子式:134.22分子量: C10H14; C6H5(CH2)3英文名稱(chēng):Butyl benzeneCAS號(hào):104-51-8
玫瑰桃紅R英文名稱(chēng):Bordeaux RCAS號(hào):5858-33-3分子式:502.43分子量: C20H12N2Na2O7S2
2--3-氯-5-三氟甲吡分子式:196.56分子量: C6H4ClF3N2英文名稱(chēng):2- amino -3- -5- threeCAS號(hào):79456-26-1
1,1'-(對(duì)二甲)雙(4,4'-二吡)二溴物分子式:576.34分子量: C28H24Br2N4英文名稱(chēng):1,1'- (two of benzene methyl (4,4'-) - pyridine bromide two) twoCAS號(hào):106867-97-4
鈷試劑英文名稱(chēng):Cobalt reagentCAS號(hào):131-91-9分子式:173.17分子量: C10H7NO2
4,6-二甲氧-2-(氧羰)嘧分子式:275.26分子量: C13H13N3O4英文名稱(chēng):4,6- two a -2- (phenyl group amino group)CAS號(hào):89392-03-0
4-二乙偶氮分子式:253.34分子量: C16H19N3英文名稱(chēng):4- two - aminoazobenzeneCAS號(hào):2481-94-9
2,3,5,6-四氟甲分子式:164.1分子量: C7H4F4英文名稱(chēng):Tetrafluorotoluene 2,3,5,6-CAS號(hào):5230-78-4
4--1,2,3,6-四氫吡分子式:159.23分子量: C11H13N英文名稱(chēng):4- phenyl -1,2,3,6- fourCAS號(hào):10338-69-9
蛤弧菌PCR檢測(cè)試劑盒品牌Cyclin J 周期素J抗體 0.2ml
CPT1A 肉毒堿棕櫚酰基轉(zhuǎn)移酶1A抗體 0.1ml
HHV8/ORF50 人類(lèi)皰疹病毒8抗體 0.2ml
Rabbit Anti-rat IgG/PE-Cy7 PE-Cy7標(biāo)記的兔抗大鼠IgG 0.1ml
Goat Anti-rabbit IgG/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488標(biāo)記的羊抗兔IgG 0.1ml
MARCH4 膜相關(guān)環(huán)指蛋白4抗體 0.2ml
phospho-ITGB4(Tyr1526) 磷酸化整合素β4抗體 0.1ml
G protein alpha G蛋白α抗體 0.2ml
CKLF 趨化素樣蛋白抗體 0.2ml
DARC/CD234 Duffy血型趨化因子受體抗體 0.2ml
CPa(Clostridium perfringens alpha toxin) A型產(chǎn)氣莢膜梭菌(魏氏梭菌) 0.2ml
Rabbit Anti-human IgM/Bio 生物素標(biāo)記的兔抗人IgM 0.3ml