鉤端螺旋體（Lep）核酸檢測試劑盒方法

鉤端螺旋體(Lep)核酸檢測試劑盒方法使用及效果：
將壓碎的一小片重量約在100 mg 左右的植物種子（約1/4 黃豆大小）或直徑約為0.5-0.7 cm（或面積相當(dāng)?shù)钠渌螤睿┑闹参锶~片直接加到新鮮配制的0.1 mL溶液A 中，95℃保溫10-15 分鐘，加入0.1 mL 溶液B，混勻，直接取上清液（相當(dāng)于PCR 體積的1/10）作為模板進(jìn)行PCR。剩余樣品可以放4℃保存。

樣本采集、存放及運輸：
1、樣本采集：各類型樣本按照常規(guī)方法采集；
2、存放：樣本在2~8℃條件下保存應(yīng)不超過72h，-70℃以下可長期保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融（zui多凍融3次）；
3、運輸：采用泡沫箱加冰密封進(jìn)行運輸。
普通PCR反應(yīng)流程:
?
自備物品：
鉤端螺旋體(Lep)核酸檢測試劑盒方法15毫升錐形離心管：用于制備樣品的容器
比色皿：用于比色的容器
96孔酶標(biāo)板：用于比色的容器
分光光度儀：用于比色分析
酶標(biāo)儀：用于微量樣品比色分析
儲存條件：
14℃或－20℃
準(zhǔn)備物品
清理液（A）                                   毫升
染色液（t B）                                   微升
稀釋液（C）                                   毫升
溶解液（tD）                                   毫升
產(chǎn)品說明書                                   1份

丁二酸二酰分子式：146.15分子量： C4H10N4O2英文名稱：Butyl succinate twoCAS號：4146-43-4

甲氧紅英文名稱：Oxygen redCAS號：68936-13-0分子式：278.74分子量： C13H15ClN4O

雙叔丁過氧異丙分子式：分子量：英文名稱：Double tert butyl peroxideCAS號：

2-氟-3-硝吡分子式：142.09分子量： C5H3FN2O2英文名稱：2- -3- nitro pyridineCAS號：1480-87-1

1,4-雙(2,2,2-三氟乙氧)分子式：274.16分子量： C10H8F6O2英文名稱：1,4- bis (2,2,2- three)CAS號：66300-61-6

N-(2-甲-5-硝)-4-(3-吡)-2-嘧胺分子式：307.31分子量： C16H13N5O2英文名稱：N- (2- methyl -5- nitro phenyl) -4- (3-) -2-CAS號：152460-09-8

諾孕美特英文名稱：NorgestometCAS號：25092-41-5分子式：372.55分子量： C23H32O4

鹽石蒜堿英文名稱：Red spider lily alkali hydrochloric acidCAS號：2188-68-3分子式：323.77142分子量：C16H18ClNO4

羥乙咪唑分子式：分子量：英文名稱：Hydroxyethyl imidazolineCAS號：

鹽溴己新英文名稱：Hydrochloric acid bromideCAS號：611-75-6分子式：412.59分子量： C14H21Br2ClN2

3-羥吡分子式：95.1分子量： C5H5NO英文名稱：3- hydroxy pyridineCAS號：109-00-2

鉤端螺旋體(Lep)核酸檢測試劑盒方法Cystatin S  胱抑素S/半胱氨酸蛋白酶抑制劑S抗體 0.2ml

Rad51  Rad51抗體 0.1ml

NPY/Neuropeptide Y  神經(jīng)肽Y抗體 0.1ml

phospho-IRS-1(Ser307)  磷酸化胰島素受體底物p-IRS-1/2抗體 0.1ml

CEA/CD66e/CEACAM5  癌胚抗原抗體 0.1ml

Hrk/BCL2 interacting protein  BCL2相互作用蛋白質(zhì)抗體 0.2ml

PCDHA8  原鈣粘附蛋白α8抗體 0.2ml

CYP11B2  醛固酮合成酶CYP11B2抗體 0.2ml

Apelin/Apelin 13  脂肪炎癥因子Apelin抗體 0.1ml

PLAGL2  多形性腺瘤基因樣蛋白2抗體 0.2ml

PLEKHM2/SKIP  血小板白細(xì)胞C激酶底物同源結(jié)構(gòu)域M2抗體 0.2ml

IGFBP2  胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白2抗體 0.1ml

反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補，特別是3'端的互補，否則會形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是末及倒數(shù)第二個堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點， 被擴增的靶序列有適宜的酶切位點， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增，且可增加引物之間形成二聚體的機會。